中国药典2010年版无菌检查及发展趋势.pptVIP

无菌检查现状 2005年版药典重大变化之一是对方法验证进行了系统的规定；这是我国药品微生物检查方法迈向科学化、合理化的一个重要标志。 通过系统的方法验证促进我国药品微生物检查标准化建设。 2005年版药典的执行在全国引起了巨大反响！ 为什么验证？ ① 采用经过验证的方法，是分析测量科学的基本要求，是各种法规遵循的工作基础。 ② 验证的理念其实早已贯穿于微生物检测的诸多方面。 ③ 2005年版药典借鉴了发达国家的经验，将微生物检查方法的验证进行了系统化的规定和要求。 ④ 有了系统的方法验证，可以避免以往因为阳性菌选择不合理，而造成的漏检与误判，这一点无论对于当前无菌检查的一次性报告，还是对于实验室认可、以其新的药品注册管理办法的要求都是一致的。 ⑤ 验证也是实验室质量控制的手段。 前言部分 新增规定：“防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。” 新增规定：“日常检验还需要对环境进行监控。” 新增规定：“ 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。”——对无菌检查的人员资质提出了要求 培养基部分 删除了硫乙醇酸盐流体培养基用于培养好氧菌、厌氧菌的规定 删除了改良马丁培养基用于培养真菌的规定 删除了选择性培养基项下加入适量中和剂或表面活性剂后面的 “ 如对氨基苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80（用于非水溶性供试品）或β-内酰胺酶（用于β-内酰胺类供试品）”等说明。 修订为：在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。 (中和剂、灭活剂见微生物限度检查法中表1） 培养基部分 将原第 6. 0.5%葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查） 修订排列为第 4 . ——按顺序排列归类培养基1.～4. 均为直接用于无菌检查的液体培养基。 培养基灵敏度检查 修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法： 规定应使用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，洗脱孢子及稀释孢子液，制成每1ml中含孢子数小于100 cfu的孢子悬液。 删除了：（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管） 吸出孢子悬液的操作方法。 培养基灵敏度检查 新增加稀释后的工作用菌液的保存条件和保存期限：“菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验证过的贮存期内使用。” 稀释液、冲洗液及其制备方法 在原有—— 1. 0.1%蛋白胨水溶液 —— 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 的基础上新增加： “可根据供试品的特性，选用其他经验证的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。” 方法验证试验 1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌种的基础上，删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃希菌。 ——是因在验证试验的实践中，发现作为革兰氏阴性杆菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中对大部分抗生素不敏感，而大肠埃希菌对抗革兰氏阴性杆菌为主的抗生素敏感性较好。 供试品的无菌检查-1 1、阳性对照用量： 2005年版：“若采用直接接种法，应增加供试品1支（或瓶）作阳性对照用。” 2010年版修订为 ：若采用直接接种法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。 ——因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是固体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应按验证的方法确定。 供试品的的无菌检查-2 薄膜过滤法： 1、新增规定：抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜 2、新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不得过1000ml 3、新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同验证试验 供试品的无菌检查-3 薄膜过滤法： 4、增、修订无菌气（喷）雾剂供试品的检验方法： ——规定冰室的温度应至少为-20℃； 新增了开启容器后 “将供试品转移至无菌容器中”的操作步骤。 供试品的无菌检查-4 薄膜过滤法： 5、增、修订：装有药物的注射器供试品的检验方法 ——删除 “装上无菌针头（非包装中所配带的）” 修订为 “取规定量，排出注射器中的内容物，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，直接过滤； 供试品的无菌检查-5 直接接种法： 删除原直接接种法中?-内酰胺类或黄胺类供试品项 。 ——因该两类供试品的无菌检查以采用薄膜过滤法加中和剂更好。 结果判断 新增订阳性对照管和阴性对照管的实验结果对于整体实验结果判断的作用： —— “ 阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。” 表1、表2和表3 表1 将表1第3列的表题原 “每种培养基最少