5.3 血红蛋白的提取和分离（人教版选修1）.ppt

* ①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需要事先处理；电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。 ②测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小，而非所带电荷的性质和分子的大小、形状。 【典例1】有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是 A.它们都是分离蛋白质的重要方法 B.它们的原理相同 C.使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要 D.以上说法都正确 【解题关键】解答本题的关键应明确以下两点： (1)凝胶色谱法的原理； (2)电泳法的原理。 【标准解答】选A。凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的一种有效方法；电泳法是利用待测样品中各种分子带电性质的差异和分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离或鉴定。所以A正确，B错；这两种方法都用到缓冲溶液，以调节溶液的酸碱度，所以C错误。综上所述，答案选A。 【互动探究】(1)相对分子质量不同的蛋白质在凝胶色谱中的运动情况如何？ 提示：①分子很小，可进入凝胶全部的内孔隙；②分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙。 (2)为消除净电荷对迁移速率的影响，可以在凝胶中加入SDS的原因是什么？ 提示：SDS所带负电荷的量远远大于蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移速率完全取决于分子的大小。 【变式训练】(2010·宿州高二检测)利用凝胶色谱法先洗脱出来的蛋白质是( ) A.相对分子质量大的 B.溶解度高的 C.相对分子质量小的 D.所带电荷多的 【解析】选A。凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快，首先洗脱出来。