原粮霉菌毒素检测手册.docVIP

原 粮 霉 菌 毒 素 检 测 实 用 操 作 手 册 江苏省微生物研究所有限公司编制 二○○六年四月·无锡 样品的采集、制备及保存 样品的采集： 样品的概念：按照规定的方法及使用适当的工具，采取一定数量的具有代表整体质量的部分，以供分析检验用，该部分叫做样品。 采样的过程：检样 原始样品 平均样品 试验样品（试样）。 采样的类型：选择性采样；客观性采样。 采集后的处理：附上标签，注明名称、日期、数量、采样地点及方法，签封并登记。 样品的制备： 原始样品的分取、粉碎、混匀、缩分的过程。注意防止成份的变化及交叉污染。 常用的制备方法： 机械混匀法（四分法、分样器法）； 粉碎、过筛法； 研磨法； 搅拌法。 样品的保存： 当天采集的样品原则上当天测。 使用的容器应用2％的次氯酸钠水溶液浸泡后，再洗干净晾干或烘干备用。 一般样品检验结束后保留样品1个月，以备复查。 待测液的制备 黄曲霉毒素B1待测液的制备： ①称量：准确称取5.0g均匀的粉碎样品； ②提取：用甲醇水（1:1）溶液25ml来振荡提取半小时，过滤； ③稀释：取滤液1ml，用甲醇水（1:1）进行稀释，记好稀释倍数； ④储藏：稀释好的待测液直接进行检测或具塞小试管封存，放置冰箱中，避光保存，隔天检测（冰箱中放置最好不超过两天）。 呕吐毒素（DON）待测液的制备： ①称量：准确称取5.0g均匀的粉碎样品； ②提取：用甲醇水（1:9）溶液25ml来振荡提取半小时，过滤； ③稀释：取滤液1ml，用甲醇水（1:9）进行稀释，记好稀释倍数； ④储藏：稀释好的待测液直接进行检测或具塞小试管封存，放置冰箱中，避光保存，隔天检测（冰箱中放置最好不超过两天）。 玉米赤霉烯酮（ZEN）待测液的制备： ①称量：准确称取5.0g均匀的粉碎样品； ②提取：用甲醇水（7:3）溶液20ml来振荡提取半小时，过滤； ③稀释：取滤液1ml，用甲醇水（7:3）进行稀释，记好稀释倍数； 储藏：稀释好的待测液直接进行检测或具塞小试管封存，放置冰箱中，避光保存，隔天检测（冰箱中放置最好不超过两天）。 大量样品的集中初筛： 1、黄曲霉毒素B1定性测定法。注意点： ①稀释：取滤液1ml，用甲醇水（1:1）进行稀释，记好稀释倍数；依据国家对小麦（玉米、花生）中限量标准来进行适当稀释。比如：玉米中国家标准最大允许量为20ug/kg，那么滤液应稀释4倍。（允许量除以5） ②试剂的配制：酶标抗原，洗涤液。 ③实验设计：截取相当数量的反应孔；设定三个对照孔（仪器调零孔，阴性对照孔，阳性对照孔（1.0ng/ml））；其余为样品孔（一般一次性测21个样品，以防操作时间过长带来的误差）。 ④显色后先目测，比较样品孔和阳性孔的颜色，若阳性孔的颜色深于样品孔，则样品孔的浓度大于1.0，样品超标。 ⑤加终止液，酶标仪测出吸光度，作为原始记录。 2、呕吐毒素（DON）定性测定法。注意点： 稀释：取滤液1ml，用甲醇水（1:9）进行稀释，记好稀释倍数；依据国家对小麦（玉米、大麦）中限量标准来进行适当稀释。比如：国家标准最大允许量为1000ug/kg，那么滤液应稀释2倍，与浓度为100ng/ml的标准点进行比较。 ② 试剂的配制：酶标二抗，洗涤液，DON单克隆抗体。 实验设计：截取相当数量的反应孔；设定2个对照孔（阴性对照孔（0ng/ml），阳性对照孔（100ng/ml））；其余为样品孔（一般一次性测21个样品，以防操作时间过长带来的误差）。 洗涤：该实验中有两次洗涤，请严格按洗涤程序进行。 ④ 显色后先目测，比较样品孔和阳性孔的颜色，若阳性孔的颜色深于样品孔，则样品孔的浓度大于100，样品超标。 加终止液，酶标仪测出吸光度，作为原始记录。 3、玉米赤霉烯酮（ZEN）定性测定法。注意点： 稀释：取滤液1ml，用甲醇水（7:3）进行稀释，记好稀释倍数；依据国家对小麦、玉米中限量标准来进行适当稀释。比如：国家标准最大允许量为60ug/kg，那么滤液应稀释3倍，与浓度为5ng/ml的标准点进行比较。 ② 试剂的配制：酶标二抗，洗涤液，DON单克隆抗体。 实验设计：截取相当数量的反应孔；设定2个对照孔（阴性对照孔（0ng/ml），阳性对照孔（5ng/ml））；其余为样品孔（一般一次性测21个样品，以防操作时间过长带来的误差）。 洗涤：该实验中有两次洗涤，请严格按洗涤程序进行。 ④ 显色后先目测，比较样品孔和阳性孔的颜色，若阳性孔的颜色深于样品孔，则样品孔的浓度大于5，样品超标。 ⑤加终止液，酶标仪测出吸光度，作为原始记录。 阳性样品的定量检测： 1、黄曲霉毒素B1定量测定法，样品主要为超标样品，通常重新提取样品并制备待测液。注意点： ①稀释：取滤液1ml，用甲醇水（1:1）进行稀释，依据国家对小麦（玉米、花生）中限量标准来进