药学课件生物技术制药（4）.pptVIP

生物技术制药——4 第四章 抗 体 制 药 第一节 概述 1890年Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒素，建立了血清疗法，开创了抗体制药。 1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为白蛋白，α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性主要存在于γ球蛋白组分。 第一节 概述 抗体（antibody,Ab）是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激后，B淋巴细胞被活化增殖、分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。即B细胞→浆细胞→球蛋白 （1）抗体与免疫球蛋白 20世纪60年代发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。病人血清中出现同抗体结构类似的球蛋白， 统称为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。 所以Ig是化学结构的概念，而抗体是生物学功能的概念。 （2）多克隆抗体与单克隆抗体 多克隆抗体（polyclonal antiboty, PcAb）：病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体。 1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体（monoclonal antibody McAb）。 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应用提供了全新的手段，还促进了基础和临床医学的发展。 单克隆抗体的应用： 单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要用于疾病的诊断和治疗。 单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原，辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。 单克隆抗体用于临床治疗，CD3单克隆抗体作为免疫抑制剂对器官移植免疫排斥有抑制作用。 以单克隆抗体作为载体的药物对肿瘤进行定向治疗。 免疫导向疗法的障碍与改造 鼠源性、分子量大 降低免疫源性、降低分子量 第二节 单克隆抗体 单克隆抗体：将抗体产生细胞（B淋巴细胞）与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的抗体。 针对一个抗原决定簇、单一B细胞克隆产生、结构和特异性完全相同、高纯度。 第二节 单克隆抗体——抗原与动物免疫 1、制备抗原→动物免疫 制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。 有的抗原可以用化学合成：地高辛 2、抗原的制备与纯化 多数抗原物为混合物，须经免疫、筛选、克隆化。 3、免疫动物品系与骨髓瘤细胞品系 骨髓瘤细胞来源：BALB/c小鼠、Lou大鼠 骨髓瘤细胞系 全 名 简称 来源 耐受 表达自身Ig分子 p3-X63-Ag8 X63 BALB/c 8-Ag Ig-r1.κ MOPC11-X45-6TG X45 BALB/c 6-TG Ig-r2b p3-NS1-Ag4.1 NS-1 BALB/c 8-Ag κ（非分泌型） p3-X63-Ag8.653 P3.653 BALB/c 8-Ag —— SP2/0-Ag14 SP2/0 BALB/c 8-Ag —— Fast-Zero FO BLAB/c 8-Ag —— Y3-Ag1,2,3 Y3 Lou 8-Ag κ链 YB2-3.0-Ag20 YB2 (LouAO)F1 8-Ag —— 免疫方法：体内、体外 1、体内免疫法：适合免疫性强、抗原量较多、8-12周 龄雌鼠。 颗粒性抗原：S.C 107个细胞初次免疫，1-3W免疫 1-2次； 可溶性抗原：10-100μg（Ag）+等量福氏完全佐剂（S.C），2-4W/1-2次（不加佐剂） 采集脾细胞前3d iv最后一次抗原（刺激B细胞分裂） 脾内免疫法：Ag 0.1-0.2ml，105/10μg（追加免疫） 2、体外免疫：不能用体内方法或抗原免 疫原性极弱且引起免疫抑制时。 抗原量少（＜10μg）、免疫期短（4-5d）、干扰因素少、杂交瘤细胞株不稳定。 4-8W BALB/c小鼠脾脏制成细胞悬液，加Ag达0.5-5μg/ml，培养4-5d（370C、5%CO2），分离脾细胞，细胞融合。 第二节 单克隆抗体 ——细胞融合与杂交瘤细胞的选择培养 HAT培养液 RPMI1640培养液 成分 浓 度 成分