电镜教学(病毒).pptVIP

4、电镜下病毒鉴别的主要依据 （1）衣壳的对称性： 病毒的基本结构：由 DNA或RNA构成的核心 、蛋白质构成的衣壳。大多数病毒的衣壳属于立体 对称型，只有少数病毒，如正粘液病毒，副粘液 病毒的衣壳是螺旋对称型 （2）核衣壳在细胞内装配的部位： DNA病毒（除个别的例外），大多在宿主细 胞核内装配；RNA病毒多在胞浆内装配。 （3）囊膜的有无： 有些病毒颗粒衣壳之外还有一层囊膜包裹。 囊膜形成的部位也不尽相同。 （4）病毒颗粒的大小： 病毒颗粒的大小对鉴别病毒非常重要。 不能进行培养的病毒，通过电镜来发现 病毒，诊断病毒更有意义。 （二）病毒核酸的研究： 1、DNA和RNA分子的直接观察 电子显微镜能直接看到DNA或RNA 识别核酸是线状还是环状结构 直接了解核酸分子结构 测量核酸分子长度 2、RNA分子二级结构的研究 3、核酸与蛋白质复合物的分析 了解蛋白质与核酸的关系 4、核酸变性图谱分析 D环分析、R环分析 5、病毒核酸的异质双链研究； 核酸变性、核酸杂交分析 对不同核酸分子之间的关系 有无相似片段做直观了解 * 取材→固定→脱水→浸透包埋 →超薄切片→染色→观察 此法不及负染方法快速， 结果较为可靠， 可进行细胞内定位。 (六) 免疫超薄切片电镜技术： 常规电镜固定液对抗原活性有破坏作用，不适于免疫电镜。 采用比较温和的固定剂进行超薄切片酶标记免疫电镜或以低浓度的戊二醛、甲醛混合固定液进行免疫胶体金技术 三、临床材料的取样和处理： 用电镜进行诊断， 取材正确与否很重要。 （一）皮肤病损： 皮肤的病毒病很多，主要是痘疱、 软疣和瘊类 例如：单纯疱疹（I型，II型） 水痘-带状疱疹 传染性软疣（痘病毒科） 寻常疣（乳多空科） 取材方便： 病损都在皮肤表面或皮肤粘膜交界处， 故采样方便。 易于识别： 这些病毒比较大（除乳多空病毒） 具有典型的形态，易于识别。 水疱状病损： 吸取疱液，滴在载网上，经负染色后，电镜观察。 （直接取材法） 皮肤结痂和疣类病损： 取下病损，加少许蒸馏水研磨成悬液，弃细胞碎片，过滤、超速离心，取沉淀染色、电镜观察。（离心提纯法） （二）粪便： 病毒性腹泻、甲型肝炎、小儿麻痹及许多肠道病毒感染性疾病可以从粪便中排出病毒。 抗体--病毒凝集法 取材原则： 1、发病早期取材，病毒含量较多； 2、取病程中几份大便，发现病毒机会多； 3、收集较多的大便：发现新病毒需深入 研究。 标本处理： 粪便用Eagle氏或Hanks液（或生理盐水）制成10%的原液，为了增加病毒含量，将细胞残渣里的病毒全部释放，可用超声波充分振荡后，经离心，取上清液做病毒悬液进行电镜检查。 如果电镜下未发现病毒，可离心，取沉淀滴加蒸馏水重新悬浮，进行琼脂扩散和电镜检查。 如果有恢复期病毒的血清，亦可做免疫电镜检查。 （三）尿液： 经超速离心浓缩尿液； 再进行假复型技术或琼脂扩散等进一步浓缩。 尿中可检查到巨细胞病毒： 孕妇 巨细胞病毒可引起胎儿先天畸形。 人乳多空病毒： 肿瘤化疗和肾移植病人，由于免疫功能抑制， 潜伏的病毒被激发活跃。 （四）血清和脑脊液： 我国乙型肝炎带病毒率可高达12% 电镜在发现乙型肝炎病毒中起了重大作用。 乙型肝炎病毒40-42nm圆形Dane颗粒， 20-22nm的小圆形颗粒和管状颗粒都是 在电镜下鉴定出来的。 脑脊液中发现病毒机会罕见，电镜不 适于进行常规诊断。 （五）鼻咽分泌物 从鼻咽分泌物和洗液中发现呼吸道病毒（流感、副流感、呼吸道细胞融合病毒、冠状病毒等）是可能的, 其中尤以冠状病毒较易发现。 用电镜检查鼻咽分泌物中的病毒，效果较差，必要性不大。 四、病毒的基础研究： (一)病毒形态结构研究： 电镜技术 \ X线衍射技术 在病毒结构研究中起重要作用 物理化学技术 / 病毒的形态研究则以电镜技术最为重要。 烟草花叶病毒是最早进行电镜观察的一种病毒。Kausche等（1939）首次用电镜证明烟草花叶病毒是一种棒状颗粒，并测出它的近似大小，但图象极不清晰。 50年代末，由于高分辨率电镜的出现、 负染色制样技术的建立，使电镜成为目前研究病毒形态的一个重要的工具。 电镜观察不仅可以区别各种病毒的形态，而