硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染表达检测.pdfVIP

100 于建宁，杨燕燕，于峰祥，等．硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染表达检测[J]．江苏农业学报，2015，31 (1)：100—105． doi：10．3969／j．issn2015．01．015 硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染 表达检测 于建宁1， 杨燕燕2， 于峰祥3， 时小艳4， 徐小波1， 王公金1 (1．江苏省农业科学院畜牧研究所／动物品种改良和繁育重点实验室，江苏南京210014；2．青岛市植物园管理处，山东青岛 223003) 摘要： 为建立硫化物醌氧化还原酶(sQ露)的肠道定向表达载体，同时通过转染小鼠肠道上皮细胞确定载体 的有效性，本试验采用重叠PcR、中间载体法、酶切连接法获得重组载体，通过脂质体转染法将重组载体转入小鼠 肠道上皮细胞，并鉴定重组载体的特异性表达。结果显示，成功构建了以肠脂肪酸结合蛋白质(IFABP)为启动子 蛋白质(GFP)。表明IFABP启动子能够在肠道细胞中定向启动|sQR的表达。 关键词：硫化物醌氧化还原酶；定向表达载体；肠脂肪酸结合蛋白质；肠上皮细胞 中图分类号： S634．3 文献标识码： A 文章编号： 10004“0(2015)01—0100旬6 fbr reductase Constructionofdirectioned Vector expression sulfide-quinone andits gene expression YU SHI XU WANG YU YANG Xiao-b01， Jian—nin91， Yan—yan2，Feng．xian93，Xiao—yan4， Gong—jinl (1．胁r如u把矿』4nim口zsc曲n∞，肋7邪u 2．QiH鲥盘。勘把恐池z 223003，劬in。) 可，№彬增210095，c^im；4．却。疗批n￡矿肌d如oz血谢胁口MM口凡。舻胱眦，五矾伊H凡od据n∞coz妇e，肌谢’盘n directed for Abstract：The vector expressionpcDNA3．1(一)一IFABP—SQR—GFPsuⅡide—quinonereductase(s(獬) were constructedmeansofnested andrestriction Vector gene successfully by PcR，inte砌edia沁Vectorenzymeligation．The the wastransfectedintomouseintestinal cells for of resultsrevealedthat lipofection S(崛gene．The epithelialby expression 山e fluorescentwasdetectedinmouseintestinal of cells，indicative《the expression“greenprotein epithelial expres或on initiatedthe ofin