专题3.2 月季的花药培养（课件）-2017-2018学年高二生物同步精品课堂（基础版）（选修1）.ppt

专题3课题2 月季的花药培养 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 （一）被子植物的花粉发育 1.雄蕊 一、基础知识 2.花粉: 3.花粉发育阶段： 小孢子四分体时期 单核期 双核期 由花粉母细胞（小孢子母细胞）历经减数分裂、有丝分裂而形成，是单倍体的生殖细胞。 小孢子 母细胞 4个 小孢子 1个小孢子 （单核居中期） 花粉管 细胞核 生殖 细胞核 营养 细胞 生殖 细胞 精子 精子 减数分裂 有丝分裂 有丝分裂 特点：细胞质浓厚 4.被子植物花粉的发育过程 【典型例题】 下列有关月季花药培养的叙述错误的是（ ） A. 月季花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的单倍体生殖细胞 B. 小孢子四分体时期与动物精子形成过程中的四分体时期相同 C. 月季花粉的一个小孢子母细胞经过分裂共形成8个精子 D. 花药培养初期不需要光照，幼小植株形成后才需要光照 B （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。 两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。 特别提醒： 直接由器官产生； 来源： 由单个细胞产生； 由愈伤组织产生。 【典型例题】 如图是花药培养产生花粉植株的两种途径，下列相关判断错误的是(　　) A.图中的a是愈伤组织 B.①和②过程的实质相同 C.选择的花药在花粉发育过程中越早越好 D.整个培养过程中的细胞增殖方式只有有丝分裂 C （三）影响花药培养的因素 1.材料的选择 花期： 初花期。 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。 花粉： 单核期。 单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 花蕾： 完全未开放。 挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花都不易选做实验材料。 （三）影响花药培养的因素 花期早期；单核居中期与靠边期之间 培养基的组成 材料的选择 亲本生长条件、材料低温处理、接种密度等 适宜的培养条件等 2.其他影响因素 主要影响因素 生长旺盛植株花药较易形成花粉植株；栽培条件的好坏也影响花粉植株的诱导率。 25℃左右，花粉培养的早期，黑暗或弱光有利于花粉分裂的启动。 【典型例题】 对花药离体培养的说法中错误的是（ ） A. 接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体后，要适时转换培养基，以便分化成植株 B. 材料消毒时需先用酒精浸泡，在无菌水中清洗，然后用氯化汞或次氯化钙溶液浸泡，最后再用无菌水冲洗 C. 接种花药后一段时间内不需要光照，但幼小植株形成后需要光照 D. 对材料的选择最常用的是焙花青﹣铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 D 二、实验操作 （一）材料的选取 醋酸洋红法、焙花青-铬矾法 方法： （1）醋酸洋红法（最常用方法） ①醋酸洋红的配置 将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。 ②染色操作 将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。 （2）焙花青-铬矾法 ①卡诺氏固定液的配制方法 将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀。 材料的选取 材料的消毒 接种和培养 （2）焙花青-铬矾法 ②焙花青—铬钒溶液的配制方法 将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。 ③染色操作 花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。 （二）材料的消毒 1. 将花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30s 2. 无菌水清洗 3. 无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4. 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中 2~4min（也可质量分数为1%的次氯酸钙 溶液或饱和漂白粉溶液） 5. 无菌水冲洗3～5次 （三）接种和培养 （1）剥取花药 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药。 注意： ①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织。 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 （2）接种 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 （3）培养 ①培养条件： 温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体长出