09级生化实验教案.docVIP

目录 生化实验课课程评分标准·························(2) 实验一3 ，5 -二硝基水杨酸比色法测量面粉中还原糖和总糖含量实验二·······……………………(6) 实验三 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳············(10) 实验四 ···········………………······(14) 实验五 ··············…(18) 实验六 肝脏谷丙转氨酶活力及活性测定 ··············…··…(20) 生化实验课课程评分标准 为了使同学们明确本课程的要求, 同时保证实验报告批改的公平和透明, 特制定此评分标准. 在以下的标准中, 常规项完成即可得到80%的分数, 未完成或者完成较差扣分; 加分项能够完成可酌情加分; 在最终的该实验成绩中, 预习报告占10%的分数, 操作过程与课堂表现占50%的分数, 最终的实验报告占40%的分数. 以下即为本次的实验评分细则详细内容： 实验前 1、常规项 1) 课前完成预习报告, 包括实验目的, 实验原理, 实验流程(概述). 无预习 报告者扣10分. 2、加分项 1) 主动检索资料, 分析资料, 提出自己的想法 2) 写出自己的预习感悟, 能够对实验提出自己的思考 实验过程 1、常规项 1) 按时到课, 无早退现象, 迟到或者早退者在该实验最终得分上扣5分, 无故 旷课者无成绩 对实验流程熟悉, 操作规范 3) 保持实验操作台和实验室整洁, 废液倒至指定位置 4) 实验过程中详细记录每一步重要操作的时间与观察到的现象 5) 实验完成, 实验记录纸须由小老师签字, 方可离开, 交实验报告时需附上实 验记录纸, 实验报告未由小老师签字者或者实验报告未附上实验记录纸者在 该实验最终成绩扣10分 2、加分项 1) 实验态度认真, 操作熟练 2) 能细心地发现实验过程中出现的问题, 并且提出自己的想法. 实验报告 1、常规项 实验报告完整, 包括实验目的、原理、实验步骤(简略)、实验中过程与 现象记录, 结果记录与分析、思考题解答 2) 实验原理叙述准确, 实验过程与现象记录详细、真实 3) 按时交实验报告, 一周之内未交者扣5分, 两周之内不交没有成绩. 2、加分项 1) 能发现实验中存在的问题, 并主动查阅相关资料 2) 能够提出合理改进实验的方案 3) 思考题解答准确、完备实验 3 , 5 -二硝基水杨酸比色法测量面粉中还原糖和总糖的含量 实验目的 通过本实验, 掌握还原糖定量测定的基本原理, 练习比色法测定糖的基本操作, 熟悉分光光度计的使用方法. 实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法. 还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类, 单糖都是还原糖, 双糖和多糖不一定是还原糖, 其中乳糖和麦芽糖是还原糖, 蔗糖和淀粉是非还原糖. 利用糖的溶解度不同, 可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来, 对没有还原性的双糖和多糖, 可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定, 再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计). 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物, 3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸. 在一定范围内, 还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系, 利用分光光度计, 在540nm 波长下测定光密度值, 查对标准曲线并计算, 便可求出样品中还原糖和总糖的含量. 由于多糖水解为单糖时, 每断裂一个糖苷键需加入一分子水, 所以在计算多糖含量时应乘以0.9. 三、实验试剂及仪器 具塞玻璃刻度试管：20mL×11、塑料离心管10mL x 6、烧杯：100mL×1、锥形瓶：100mL×1、容量瓶：100mL×3、吸量管：1mL×1 2mL×2 10mL×1、恒温水浴锅、离心机、电子天平、分光光度计、玻璃棒、胶头滴管、白瓷板、旋涡混合仪 1mg/mL 葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂、碘-碘化钾溶液、酚酞指示剂、6mol/L HCl 、6mol/L NaOH. 、操作步骤 1. 样品中还原糖和总糖的提取 (1)还原糖的提取 准确称取3.00g 食用面粉, 放入100mL 烧杯中, 先用少量蒸馏水调成糊状, 然后加入50mL 蒸馏水, 搅匀, 置于50恒温水浴中保温20min, 使还原糖浸出. 将浸出液(含沉淀)转移到塑料离心管中