实验13 离子交换柱层析法测定糖化血红蛋白.pptVIP

* * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验13 离子交换柱层析法测定糖化血红蛋白 实验 13 离子交换柱层析法测定糖化血红蛋白 河北北方学院医学检验学院　侯丽娟 实验目的 掌握：糖化血红蛋白测定的临床意义。 熟悉：层析法的原理及其在临床生化检验中的 应用。 实验原理 糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin，GHb）和非GHb存在电荷差异，采用Bio-Rex70阳离子交换树脂进行离子交换层析。pH6.7的磷酸盐缓冲液可将带正电荷较少、与树脂亲和力较弱的GHb首先洗脱下来，测定洗脱液中GHb和溶血液中总Hb的吸光度值，然后计算其占总Hb的百分率。 试剂与器材 1．0.2mol/L Na2HPO4溶液。 2．0.2mol/L NaH2PO4溶液。 3．pH6.4磷酸盐缓冲液 4．pH6.7磷酸盐缓冲液 5．溶血剂 。 8．Bio-Rex70阳离子交换树脂 200～400目，钠型， 分析纯级。 9．离子交换层析柱。 操作步骤 树脂处理 柱的清洗与存放 比色 对照 洗脱 上样 柱的准备 血红蛋白溶液的制备 装柱 计算 参考范围 GHb ：5.0%~8.0%。 临床意义 GHb可反映测定前约6～8周血糖的平均水平，不受血糖暂时波动的影响，其临床意义主要表现为： 1．糖尿病患者血糖控制效果的良好指标。 2．监测糖尿病微小血管并发症、慢性并发症的发 生和发展。 3．用于糖尿病高血糖和应激性高血糖的鉴别诊断。 注意事项 1．控制温度，选用具有准确pH和离子强度的缓冲液。 2．标本4℃冰箱可稳定4d～7d。 3．EDTA和氟化物不影响结果，肝素可使结果增高。 4．有HbF、HbH及HbBart等异常增高者不宜用此法。 5．不同测定方法存在测定组分上的差异，应用该指标时应注意不同方法间参考值的差异。 6．应采用一定的方法将不稳定的GHb除去。 评价 该法简单易行，用血量少，短时间内可报告结果，结果可满足临床对糖尿病监控的要求；但该法易受人工因素和环境温度的影响，可能会导致洗脱不完全或过度洗脱；某些血红蛋白异常增加时，会与GHb同时洗脱而使结果偏高。目前，控制温度的离子交换微柱层析法和亲和层析法是推荐的常规方法，高效液相色谱法是参考方法。 思考题 1．解释糖化血红蛋白的概念和临床意义。 2．糖化血红蛋白的测定方法有哪些？