医疗器械无菌实验课件_by_wangwenqing.pptVIP

医疗器械无菌实验 主讲人：王文庆 山东省医疗器械产品质量检验中心 2007年6月 概 述 实验器材 实验准备 实验方法 抑菌验证 总 结 概 述 无菌医疗器械灭菌控制中的微生物检验包括医疗器械灭菌过程确认中的微生物检验，常规生产过程控制中的微生物检验，以及产品放行中的微生物检验 。 本文以GB/T 14233.2-2005 《医用输液、输血、注射器具检验方法 第二部分：生物试验方法》中“3.无菌实验”部分，以及《中华人民共和国药典》 2005年版二部附录XI H“无菌检查法”为依据，对医疗器械产品放行中的无菌实验进行总结概述。  “无菌”的概念： 围绕无菌有两个英文单词，sterility和sterile。前者定义为无存活微生物的程度，用于灭菌要求；后者定义为无存活微生物，用于产品名称和包装标识。在我国的诸多标准中，都将这两个单词混称为“无菌”。 对于一个给定的灭菌过程，无论灭菌的程度如何，微生物总是难免以一个有限概率存活下来 ，这种存活概率由微生物的数量、抗性以及在处理过程中微生物所处的环境来确定。 “无菌”是指微生物存活概率低于10-6； “无菌医疗器械”表示为医疗器械中，有残存微生物的医疗器械的概率小于10-6，即一百万件中不多于1件。这是医疗器械公认的无菌保证水平。 “无菌实验”的概念： 无菌实验是用于检验一次性使用无菌医疗器械是否染有活菌的一种方法。本实验系将医疗器械或其浸提液接种于培养基内，以检验供试品是否有细菌和真菌污染，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，同时也应避免在抑菌条件下进行实验操作。 实验器材 1. 仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪、比浊仪等。 2. 用具 试管、注射器、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管、精密pH试纸、集菌培养器、移液器、剪刀、镊子，无菌衣、裤、帽、口罩，灭菌袋或牛皮纸等。 3. 试剂 75%(V/V)乙醇、新洁尔灭(1：1000)溶液或其他适宜消毒溶液， 2mol/L盐酸溶液、2mol/L氢氧化钠溶液等； 质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液、其他符合2005年版《中国药典》附录XI H“无菌检查法”要求的稀释液和冲洗液（0.1%的蛋白胨水溶液和pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液等）。 实验准备 1. 器具灭菌 1.1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，盖严，灭菌备用。 1.2 试管、离心管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2/3处，用牛皮纸将管口包扎紧，灭菌备用。 1.3 将注射器、针头配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(如铝制饭盒)内，盖严，用灭菌袋或牛皮纸包扎好后，灭菌备用。 1.4 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用灭菌袋或牛皮纸包严，湿热灭菌备用或使用一次性的无菌物品。 1.5 灭菌条件为121℃湿热灭菌20分钟，物品切勿立即取出置冷处，以免急速冷却，使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染菌。适于高温灭菌的器皿也可采用160℃干热灭菌2小时。 2. 培养基的准备 2.1 培养基的制备 硫乙醇酸盐流体培养基用于培养好氧菌、厌氧菌，改良马丁培养基用于培养真菌。 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制，需注意培养基的PH值应符合规定，否则必须校正后，灭菌使用。 制备好的培养基应保存在2-25℃、避光的环境。培养基若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用。若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 对于硫乙醇酸盐流体培养基，在供试品接种前，其氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5。否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。无菌试验培养时间结束时，氧化层高度不得超过培养基深度的1/2。 2.2 培养基的无菌性检查 临用前须对配制好的培养基进行无菌性检查，每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），培养14天，证明无菌生长后方可使用。 2.3 培养基灵敏度检查 2.3.1 标准菌株 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26 003 铜绿假单胞菌 CMCC（B）10 104 枯草芽孢杆菌 CMCC（B）63 501 生孢梭菌 CMCC（B）64 941 白色念珠菌 CMCC（F）98 001 黑曲霉 CMCC（F）98 003 2.3.2 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35℃培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23-