[教育]2菌种选育6.ppt

2 菌种选育 2.1 菌种筛选 2.1 菌种筛选 菌种来源 根据资料直接向有关科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买 生产选种 从自然环境中分离筛选新的微生物菌种 2.1.1 微生物的特性 有些微生物能在厌氧的条件下生长 有些微生物能够利用简单的有机物和无机物满足自身的生长 有些微生物能利用较复杂的化合物 有些微生物能进行复杂的代谢 有些微生物能在极端的环境下生长 2.1.2 工业生产用菌种的要求 2.1.2 工业生产用菌种的要求 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.1 菌种分离的一般过程 目标：高效地获取目的产物高产菌株 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.2 采样 注意的问题 气候、水分、空气 来源要广 结合产品的特点,可寻找已适应相应环境压力的微生物类群 标签：地点、时间、气候等 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.2 采样 采样对象（以采集土壤为主） 一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主；富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内 采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.2 采样 采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好 采土方式： 在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考 为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.3 材料的预处理 为了提高分离效率，需用不同的方法对材料进行预处理 物理方法（加热、膜过滤） 化学方法（pH） 诱饵法 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.4 增殖培养 为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择性培养基，选择一定的培养条件来控制 例如碳源利用的控制，可选定糖、淀粉、纤维素、石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.5 目的微生物的分离（筛选） （1）施加选择性压力分离法 例如 常用几丁质培养基分离土壤和水中的放线菌 大多数放线菌培养基pH在6.7~7.5，嗜酸菌pH在4.5~5.0。 在分离放线菌和细菌时，可加抗真菌抗生素；分离真菌时，加抗细菌抗 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.5 目的微生物的分离（筛选） （1）施加选择性压力分离法 培养方法可采用分批式富集培养（摇瓶培养）和恒化富集培养（连续培养） 分批式富集培养是将富集培养物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性压力，如此重复转种几次后，再取此富集培养物接种到固体培养基上，以获得单菌落 恒化富集培养是通过改变限制性基质的浓度，来控制不同菌株的比生长速率 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.5 目的微生物的分离（筛选） （2）随机分离的方法 (A) 抗生素生产菌的分离 将摇瓶培养的过滤液或细胞提取液、混合提取液用联合试验菌筛选 如： 黄色霉素抗生素就是用枯草杆菌和绿色产色链霉菌或巴式梭状芽孢杆菌筛选出的 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.5 目的微生物的分离（筛选） （2）随机分离的方法 (B) 药理活性化合物产生菌的分离——体外筛选 筛选能抑制生物代谢途径中一关键性酶（靶酶或靶标酶）的活性物质 如：免疫激活剂生产菌的分离 一般认为能作用细胞表面的物质，可能具有免疫修饰作用，因此以存在于细胞表面的氨基肽酶B、氨基肽酶A、碱性磷酸脂酶为靶分子，筛选这些酶的抑制剂，发现抑制这些酶，会增强细胞性免疫或抗体产生能力 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.5 目的微生物的分离（筛选） （2）随机分离的方法 (B) 药理活性化合物产生菌的分离——体外筛选 如：抗病毒药物产生菌的分离 检测病毒复制中特有的DNA复制酶和核酸合成酶的抑制剂，是选择性高的筛选方法 如：免疫激活剂生产菌的分离 一般认为能作用细胞表面的物质，可能具有免疫修饰作用，因此以存在于细胞表面的氨基肽酶B、氨基肽酶A、碱性磷酸脂酶为靶分子，筛选这些酶的抑制剂，发现抑制这些酶，会增强细胞性免疫或抗体产生能力 2.1.3 自然环境中目的微生物分离 2.1.3.5 目的微生物的分离（筛选） （2）随机分离的方法 (C) 抗肿瘤药物生产菌的分离 利用微生物筛选作用于DNA的抗肿瘤药物---具有灵敏度高