蛋白芯片在N-琥珀酰亚胺活化酯NHS基片上的分析方法.PDFVIP

蛋白芯片在 N-琥珀酰亚胺活化酯（NHS）基 片上的分析方法 2.4 版本 2016 年 9 月 如有技术问题，请联系： 南京科瑞芯生物科技有限公司 地址：南京市雨花台区凤展路 30 号 2 幢 1603 室 E-mail: creativechip@ 网址： 简介: 科瑞芯提供全系列的高质量微阵列载片，可用于打印各种生物芯片，包括蛋白质生 物芯片，聚糖生物芯片，反相蛋白微阵列和小分子生物芯片。 NHS 生物芯片基片上含有 高度活性的 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯表面，其与伯胺基团形成共价键。 NHS 载玻片具 有高负载能力和极低的固定蛋白质（抗体和抗原），胺修饰的聚糖和胺修饰的小化学分子 的荧光背景。 储存和处理： 使用前储存在-20°C ！ 打开包装之前，让包装在室温下放置约 20 分钟。 打开包 装取出要使用的基片后，将未使用的载玻片密封在里面装有干燥剂的可重复使用的小袋中， 并重新-20°C 冷藏。避免与基片表面接触，以尽量减少表面污染和磨损。 若需要移取基 片，请戴上手套再接触基片的边缘。 需要用的缓冲液： 封闭缓冲液： NHS 封闭缓冲液，1X 浓度 PBST （含有 1％BSA） 分析缓冲液：蛋白芯片分析缓冲液，1X 浓度 清洗缓冲液：20mM Tris-HCl，pH7.6,150mM NaCl，0.05％Tween20 （TBST） 芯片封闭: 1.将分析用的隔离器固定在载玻片表面上; 2.室温下在封闭缓冲液中封闭载玻片至少 0.5 小时，并以 80rpm 轻轻摇动; 分子结合分析或免疫分析： 1.将生物样品按需要的浓度或稀释比例溶解在分析缓冲液中； 2.通过真空抽吸去除封闭缓冲液或用移液枪将液体从每个隔离室中移出; 3.立即将 80 微升样品（在步骤 1 中制备）施加到适当的隔离室中; 4.用粘性密封盖住隔离器，以防止分析液蒸发; 5.在转速 80rpm 的旋转摇床上孵育载玻片至少 1 小时; 6.孵育 1 小时后，从摇床上取下载玻片，取下盖子。 7.通过真空吸取或移液将样品从每个室中取出; 8.通过加入 100 µl 洗涤缓冲液两次（每次洗涤在摇床上孵育 5 分钟）来清洗每个室; 对于生物素标记的样品，按照以下步骤对载玻片进行染色： 9.向每个测定室添加约80μl 浓度为 1μg/ ml 的Cy3 或 Cy5 标记的链霉抗生物素蛋白; 10.用粘合剂密封盖住隔离器; 11.在旋转摇床上以 80rpm 的速度孵育载玻片至少 30 分钟; 12.通过真空抽吸或移液枪将样品从每个室中取出; 13.通过加入 100μl 洗涤缓冲液清洗每个室; 14.将载玻片从隔离器中取出，并在 100 毫升清洗缓冲液的 Coplin 罐中冲洗载玻片（旋转 摇床上孵育 5 分钟）。 15.用 Millipore 水清洗洗载玻片 2 分钟; 16.在离心机中旋转载玻片 15 秒; 17.用荧光扫描仪以适当的波长和设置扫描载玻片; 18.保存扫描图像并用适当的定量软件处理数据。 对于未标记的抗体样品，按照以下步骤对载玻片进行染色： 9.向每个测定室加入〜80μlCy3 或 Cy5 标记的二抗，浓度为 1μg/ ml; 10.用粘合剂密封盖住隔离器; 11.在旋转摇床上以 80rpm 的速度孵育载玻片至少 30 分钟; 12.通过真空抽吸或移液枪从每个隔离室中取出样品; 13.通过加入 100μl 洗涤缓冲液清洗每个室; 14. 将载玻片从隔离器中取出，并在 100 毫升清洗缓冲液的 Coplin 罐中冲洗载玻片（旋 转摇床上孵育 5 分钟）; 15.用 Millipore 水清洗洗载玻片 2 分钟; 16.在离心机中旋转载玻片 15 秒; 17.用荧光扫描仪以适当的波长和设置扫描载玻片; 糖芯片在 N-琥珀酰亚胺活化酯（NHS）基片 上的分析方法 2.4 版本 2016 年 9 月 如有技术问题，请