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设计性实验-体外抗凝血实验鉴别未知药物：肝素与枸橼酸钠精品
体外抗凝血实验鉴别未知药物：肝素与枸橼酸钠 设计实验： * 凝血酶原 凝血酶 纤维蛋白原 纤维蛋白 Ⅻ Ⅻa Ⅺ Ⅺa Ⅸ Ⅸa Ⅹ Ⅹ TF Ⅶ Ca2+ PF3 Ca2+ Ⅷa Ⅹa PF3 Ca2+ Ⅴa 内源性凝血途径 外源性凝血途径 * 肝素 主要抗凝机制： 与ATⅢ结合，增强ATⅢ与凝血酶的亲和力。 * heparin thrombin* AT III AT III heparin thrombin* thrombin* heparin AT III AT III thrombin* heparin * can also be Factor Xa 带有大量阴电荷 有带阳电荷的赖氨酸残基 发生变构 重新作用于其他ATⅢ，连续应用可使后者耗竭 * 枸橼酸钠 抗凝机制: 枸橼酸钠能络合血浆中的钙离子,并结合成难解离的可溶性枸橼酸钙复合物,使血液脱钙,从而阻滞了钙参与凝血过程而发挥抗凝血作用。 * 肝素与枸橼酸钠的作用特点、作用机理 肝素 枸橼酸钠 体内抗凝 有 无 体外抗凝 有 有 作用机理 激活AT-III 络合Ca2+ 拮抗剂 硫酸鱼精蛋白 氯化钙 * 两药的抗凝机制不同，特异性拮抗剂不同，如何设计实验并鉴别两药？ * 各小组分别进行实验设计（30分钟） 实验设计要点 首先证明两种药物的体外抗凝血作用 如何分组？ 阴性对照：蒸馏水/生理盐水？ 受试动物？取血方法？ 判断血凝的方法？ * 2. 根据肝素与枸橼酸钠抗凝血机理的不同点，选用什么办法进行二者的鉴别？ * 实验分组 阴性对照：生理盐水 未知药物1 未知药物1 未知药物2 未知药物2 * 受试动物 家兔 * 取血方法 心脏取血 家兔心脏取血方法： 一人稳妥固定家兔，腹面向上，采血者一手持浸润过的采血用注射器，另一手指于家兔前胸部查找心跳最强处（一般位于胸骨左缘4-5肋间），于肋间隙进针，垂直刺入，待有突破感即刺入胸腔，垂直向下刺入心脏。如刺入心脏，则注射器颤动均匀稳定，与心跳频率一致，此时回吸血液，有血液进入则证明进入心脏。 * 向每支试管中加入兔血后充分混匀，计时，放入37℃恒温水浴中。每隔30秒将试管轻轻倒转，观察血凝。 注意事项：加入每支试管中的血量应一致 判断血凝方法——试管法 * 0.1 ml 生理盐水 未知药物1 未知药物2 取血 0.9 ml 血 混匀，37℃，计时 CaCl2 鱼精蛋白 若2、3、4、5管未凝 * 鉴别两种未知药物： 1. 根据肝素与枸橼酸钠抗凝血机制的不同，向未凝血的两未知药物试管中分别加入3%氯化钙溶液，观察是否凝血。出现凝血者证明为枸橼酸钠。 2. 向未凝血试管中加入鱼精蛋白，出现凝血即证明为肝素。 * * *
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