中药分子检测解决方案PPT.pptxVIP

中药材分子鉴定及耶拿高效解决方案介绍Quality is the Difference!主要内容中药材分子检方法介绍目标客户及客户工作中的主要困难耶拿公司的相关高效整体解决方案中药分子检测对AJ销售的重要意义中药材分子鉴定方法介绍中药材鉴定的主要内容中药材：包括药材、药材粉末、部分药材饮片鉴定目的：保证用药的安全性和有效性中药材鉴定的主要内容重点、难点鉴定目的：保证用药的安全性和有效性四大传统经典的鉴定方法二、性状鉴定：利用人体的感觉器官（眼观、手摸、鼻闻、口尝、水试、火试等）去观察性状，进行鉴定局限性：可以确定部分中药的基原品种，但难以区别开大部分来自近缘物种的中药材和中药饮片四大传统经典的鉴定方法三、显微鉴定：利用显微镜对药材或成方制剂的组织、细胞或内含物进行鉴别局限性：可以确定部分中药的基原品种，但难以区别开大部分来自近缘物种的中药材和中药饮片四大传统经典的鉴定方法四、理化鉴定：利用物理或化学的方法对药材和制剂进行定性和定量的分析（色谱、紫外、红外、质谱、核磁共振等）局限性：因中药活性成分的含量受到其生长条件、采收时间、贮藏等因素的影响而发生变化，容易影响鉴定结果的准确性，同时亲缘关系较近的物种化学成分相似而难以区分中药材的分子鉴定法应运而生正如法医领域的犯罪嫌疑人鉴定、亲子鉴定等，采用的就是基于DNA的分子鉴定法A、T、G、C四种核苷酸组成的基因序列每个人种都有自己特定的基因每个人都有自己特定的基因利用DNA分子鉴定的方法，可以最准确、最科学地得到真伪鉴定结果中国药典在中药材分子鉴定相关内容的发展2010版《中国药典》收载了乌梢蛇饮片、蕲蛇饮片、川贝母药材的DNA分子鉴定方法2015版《中国药典》收载了“中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则”，标志着中药材的分子鉴定从实验室科研层面进入国家标准的应用层面中药材分子鉴定方法——聚合酶链式反应法（PCR法）第一步 第二步 第三步核酸质控以2015中国药典中的乌梢蛇饮片为例：聚合酶链式反应法——PCR第一步：DNA提取以2015中国药典中的乌梢蛇饮片为例：聚合酶链式反应法第二步：PCR反应PCR：在体外将某一DNA片段（目的基因）扩增，以获得大量的目的DNA片段2n指数扩增1—2—4—8—16—32—64—128--------一般PCR反应运行30个循环，即可得到几百万条目的DNA片段以2015中国药典中的乌梢蛇饮片为例：聚合酶链式反应法第三步：电泳检测（含电泳分离和凝胶成像条带分析）结论：样品是乌梢蛇川贝母蕲蛇2015中国药典中另一种分子鉴定方法：中药材DNA条形码分子鉴定由中国中医科学院中药研究所所长 陈士林院士为主开发制定主要的核心也是PCR方法，区别：下游改用测序的方法，比对数据库序列来鉴定测序鉴定中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则介绍核心：PCR法中药材DNA条形码分子鉴定法，就是通过分子生物学的方法测定中药材基因组上一段标准的、具有足够变异的特有的DNA?序列，来实现物种鉴定。指导原则中，以ITS2为主体条形码序列鉴定中药材的方法体系植物类中药材选用ITS2为主体序列，psbA-trnH为辅助序列动物类中药材采用COI为主体序列，ITS2为辅助序列ITS2：核糖体DNA中内部转录间隔区2psbA-trnH：叶绿体上去除psbA基因及trnH基因的基因间隔区序列COI：线粒体上细胞色素C氧化酶辅酶I以上基因片段通常是几百bp，都具有多态性，常用于物种鉴定实验设计：ITS2片段扩增：正向引物ITS2F：5′-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3′；反向引物ITS3R：5′-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3′。psbA-trnH片段扩增正向引物：5′-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3′；反向引物：5′-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3′。COI序列扩增正向引物HCO2198：5′-TAAACTTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′；反向引物LCO1490：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′。PCR反应体系配置：PCR反应体系以25 μL为参照：PCR Buffer（10×）2.5 μLMgCl2 2 μL（25 mmol/L）dNTPs混合物 2 μL（2.5 mmol/L）上游和下游引物各1.0 μL（2.5 μmol/L）Taq DNA聚合酶 1.0 U模板DNA 1 μL加无菌双蒸水至25 μL应设置未加模板DNA的阴性对照。PCR反应程序：ITS2序列扩增程序：94℃，变性5 min；94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸45 s，40个循环；72℃延伸10 min。