第四部分组织培养.pptVIP

你认为培养基应有哪些成分? MS培养基 MS培养基含有十几多种化合物，配制不方便也难称量准确，可将培养基中的各种成分扩大一定倍数分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。(母液配制见下表) MS培养基的配制: 按比例分别取适量各种成分的母液，加入烧杯，称取适量的蔗糖和琼脂，加适量蒸馏水并加热使琼脂溶解，按照需要的浓度分别加入激素，用1mol/L NaOH和1mol/L HCl溶液调节pH至5.8~6.0。灭菌。 调控芽和根的发生 细胞分裂素/生长素大致相等时，愈伤组织继续生长而不分化 细胞分裂素/生长素比例高，有利芽的发生 细胞分裂素/生长素比例低，有利根的发生 三、实验原理 1、影响植物组织培养的因素有哪些？ 植物的材料 培养基 植物激素 pH值 外界因素（温度，光照，通气状况，材料处理等） 愈伤组织在不同培养基上，分化形成芽或根，进而形成小苗(试管苗)。 * * 实验11 植物的组织培养 1、植物组织培养的过程 外植体 愈伤组织 胚状体 或根、芽等 植物体 脱分化 再分化 愈伤组织 一、基础知识 2、植物组织培养的培养基 培养基的成分 矿质元素 蔗糖 植物激素 维生素 有机添加物 琼脂等 外植体 愈伤组织 胚状体 或根、芽 植物体 脱分化 再分化 培养基 培养基 Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的。能满足植物细胞的营养和生理需要，适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 3、植物激素对植物组织培养的影响 外植体 愈伤组织 胚状体 或根、芽 植物体 脱分化 再分化 无菌 培养基 无菌 培养基 实验中使用的生长素是人工合成的萘乙酸（NAA），细胞分裂素也是人工合成的苄基腺嘌呤（BA） MS培养基+相对较多的细胞分裂素（BA）+相对较少的生长素（NAA）→→发芽培养基（长丛状苗）。 MS培养基+相对较多的生长素（NAA）→→生根培养基。 配制培养基并灭菌 取材并消毒 接种至发芽培养基 转入生根培养基 炼苗并移栽（至草炭土或蛭石中） 定植（栽培至土中） 丛状苗 二、植物组织培养的基本过程 外植体的消毒： 流水冲洗20分钟 放入70﹪酒精浸泡10min 在5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟 在另一5%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟 无菌水冲洗2~3次，无菌吸水纸吸干 配制培养基并灭菌 取材并消毒 接种至发芽培养基 转入生根培养基 炼苗并移栽（至草炭土或蛭石中） 定植（栽培至土中） 丛状苗 炼苗与移栽 炼苗：先在外界环境闭瓶锻炼3天，再开瓶锻炼3天（以培养基上开始长出菌为宜）。 移栽：去净培养基，可先在灭过菌的草炭土或蛭石上培养使根系发达再转移到土壤中。 四、问题讨论 2.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？ 不同植物、不同组织的生根和生芽对生长素和细胞分裂素浓度的需求是不一样的。因此，不可贸然使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度。可以参考已发表文献上成熟的经验，也可自己探索。 3.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？ 植物中存在的天然激素都有相应的使之分解的酶，这样，天然激素在植物体内作用和存在的时间就较短，而人工合成激素在植物中没有相应的分解它的酶，所以作用和存在的时间长，作用效果明显。 切取 接种 形成愈伤组织 形成试管苗 试管苗大规模培养 移栽