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氨基胍在兔视神经损伤后对视网膜神经节细胞的保护性作用研究 A study of the protective effect of Aminogunidine on retinal ganglion cells after optic nerve injury in rabbits 目 录 中文摘要……………………………………………………………… 1 英文摘要……………………………………………………………… 4 英文缩写……………………………………………………………… 7 研究论文 氨基胍在兔视神经损伤后对视网膜神经节细胞的保护 性作用研究 前言…………………………………………………………………… 8 材料与方法……………………………………………………… 10 结果……………………………………………………………… 19 讨论……………………………………………………………… 28 小结……………………………………………………………… 36 问题与展望……………………………………………………… 37 参考文献………………………………………………………… 38 附图……………………………………………………………… 41 综述 氨基胍对视神经损伤后视网膜神经节细胞保护性作用…… 45 参考文献………………………………………………………… 50 致谢…………………………………………………………………… 54 个人简历……………………………………………………………… 55 氨基胍在兔视神经损伤后对视网膜神经节细胞的保护性作用研究 中文摘要 目的 视神经损伤是眼科常见疾病,多并发于颅脑外伤 ,预后不良,常致患者失明。由于视神经损伤的发病机制尚未完全明了，所以迄今为止其治疗仍是国内外眼科界的一大难题。本试验通过建立兔眼视神经夹伤的动物模型，及伤后早期应用氨基胍治疗（iNOS抑制剂），动态观察视神经损伤后视网膜病理形态学改变，研究NO、iNOS、MDA、SODkg, 检查双眼屈光间质清,瞳孔等大等圆,对光反射正常,眼底无异常。将实验兔随机分为正常对照组、损伤治疗组、损伤对照组共3组。正常对照组(6只，12只眼)：从66只兔中随机抽取6只。损伤治疗组：余60只兔用同一反向动脉夹于球后3mm处夹闭视神经20s制成视神经损伤的动物模型,然后随机抽取30只给予2﹪氨基胍（Aminogunidine,AG）80mg/kg耳缘静脉注射，每日1次；损伤对照组：另外30只耳缘静脉注射等量生理盐水。按照视神经损伤后1d、3d、7d、14d、21d又随机分为5组，每组兔(6只，12只眼)． 造模成功后分别于伤后1d、3d、7d、14d、21d处死动物，取出眼球，其中一部分眼球固定、石蜡包埋常规做视网膜切片，进行HE染色及视网膜凋亡细胞（TUNEL）NO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、丙二醛(MDA）spss13.0软件包进行统计分析。 结果 1.视网膜HE 染色：正常对照组视网膜内界膜平滑完整，三层细胞分界清楚，节细胞呈单层排列，按胞核大小分为两类：一类大核浅染；另一类小核深染，核内染色质分布均匀。内、外核层细胞均呈多层排列，其厚度、染色均匀，细胞排列整齐紧密。同一时间点损伤治疗组视网膜的病理改变（细胞间隙，组织水肿，细胞减少），均较损伤对照组明显减轻。本实验结果提示视神经损伤后早期耳缘静脉注射AG能够及时挽救未受损的视网膜细胞，对维持视网膜的形态和功能起到了重要作用。 2.TUNEL 染色凋亡细胞计数和定位：视网膜切片中显示TUNEL 阳性细胞（凋亡细胞）不仅见于视网膜神经节细胞层，还见于内外核 层。凋亡细胞胞核染色，呈棕黄色, 部分可由于核固缩扭曲破裂而失去正常形态，并可见凋亡小体。正常对照组视网膜切片极少见到凋亡细胞。本实验仅计数节细胞层的凋亡情况进行比较研究。同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较，差异具有统计学意义(P0.05)。说明此种治疗方法能够减少视神经损伤后RGCs的凋亡。 3.一氧化氮(NO)含量,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力测定：正常视网膜组织中很少表达iNOS，但含有少量NO，在损伤后二者含量逐渐增高，同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较，NO含量和iNOS活性差异有统计学意义(P 0.05)，提示AG通过抑制iNOS活力减少NO的产生，对视神经损伤后的RGCs起到保护作用。 4. 丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力检测 ：正常视网膜组织匀浆中含一定量的MDA和SOD。同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较，MDA含量差异有统计学意义(P 0.05)。同一时间点损伤对照组和损伤治疗组比较，SOD 活性差异有统计学意义(P0.05)。表明AG能明显提高超氧化物歧化酶的活性，降低脂质