RP-HPLC法测定马兜铃酸含量方法的优化.docVIP

RP-HPLC法测定马兜铃酸含量方法的优化 ???????????? 作者：杜晓曦,周跃华,路金才,韩娜,周娟,毕开顺 【摘要】? 目的 优化高效液相色谱法对马兜铃酸进行含量分析。方法 通过比较不同提取溶剂、不同提取方法,确定较为合理的供试品溶液制备方法。比较不同流动相条件对马兜铃酸含量测定的影响,选择含量分析色谱条件。测定不同波长下的最低检出限度,确定痕量分析条件。结果 供试品溶液制备中以70%甲醇直接加热回流提取,效率优于其他提取方法。做一般含量分析时可以选择流动相为甲醇-1%醋酸水溶液(70∶30)或乙腈-0.3%(NH4)2CO3(pH=7.5) (25∶75),250 nm或319 nm作为检测波长。做痕量分析时宜选择流动相为乙腈-0.3%(NH4)2CO3(pH=7.5)(25∶75),并选择检测波长为224 nm,最小检出量可达0.02 ng。结论 本实验所建立的方法可以准确可靠的进行马兜铃酸含量分析并进行痕量检查。 【关键词】? 马兜铃酸；高效液相色谱法；含量测定 ??? Abstract：Objective To optimize the RP-HPLC procedure for the determination of aristolochic acid. Method Different extraction solvents and methods have been screened to get the most efficient way for sample preparation. The influence of different mobile systems on quantitation were compared to choose an approprate mobile system for determination. Besides, the minimum limits of different detecting waves were measured to give the method to detect trace amount of aristolochic acid. Result Refluxing with 70% methanol was better than other ways in sample preparation. Both methanol-1% acetic acid (70∶30) solution and 0.3% ammonium carbonate solution (pH=7.5)-acetonitrile (75∶25) with wavelength of 250 nm and 319 nm can be used for quantitation while 0.3% ammonium carbonate solution (pH=7.5)-acetonitrile (75∶25) with wavelength of 224 nm for trace detection. The minimum detectable amount was 0.02 ng. Conclusion The method established can be applied to determinate aristolochic acid and detect trace amout exactly.??? 　　Key words：aristolochic acid；RP-HPLC procedure；sample preparation；chromatographic condition 　　马兜铃酸是马兜铃科植物中的主要成分,近年来已证实其具有肾脏毒性。鉴于马兜铃科植物种类很多,名称混淆现象也很常见,各地方用药种类十分复杂,所以,有必要建立一个简单有效、便于推广的方法对马兜铃酸进行定量分析,以便真实准确地反映出药材或制剂中马兜铃酸的含量,保证用药安全。目前,高效液相色谱法是在马兜铃酸含量测定中使用最多、发展也较为成熟的一种方法,但测定条件多种多样。为此,本试验从供试品溶液的制备、色谱条件的选择两个方面进行了研究,以期建立并推荐一个能准确反映马兜铃酸含量的高效液相色谱法。 　　1? 仪器与试剂 ??? 美国科普公司SSI PC3000高效液相色谱仪,Model 500紫外检测器,HORIBA B-212PH计,Anastar色谱工作站。色谱纯试剂购自天津康科德化学试剂厂,分析纯试剂购自山东禹王化学试剂厂。关木通(两年生)采自沈阳药科大学药用植物园,马兜铃酸A对照品购自中国生物制品检定所(批号110746-200204)。 　　2?