【2018年必威体育精装版整理】植物胚胎培养.pptVIP

双受精后的胚乳核，先分裂形成游离核，通常将这一时期的胚乳称为“游离核期”。 此后胚乳核继续发育形成细胞壁，即形成许多小的细胞。这一时期称为“胚乳细胞期” 胚乳类型 胚乳按发育初期是否形成细胞壁可分为 三种类型： 核型胚乳 初生胚乳核在最初的发育时期只进行细胞核分裂而细胞质不分裂，不形成细胞壁，胚囊中积累许多游离核。胚乳发育后期才产生细胞壁，形成胚乳细胞。是被子植物较普遍的胚乳发育形式。 (A) globular (B) heart shaped, (C) torpedo ②幼胚剥离 胚剥离的成功与否是幼胚培养成功与否的关键。幼胚是一种半透明、高粘稠状组织，剥离过程中极易失水干缩，一定要注意保湿，且操作要迅速。 有关胚发育的细胞学和生理生化研究表明，胚柄积极参与幼胚的发育，特别是球形期以前的幼胚培养，胚剥离时应带胚柄。另外胚柄促进幼胚离体生长的作用能被浓度为5mg/L的赤霉素（GA）有效取代。 ③培养条件的控制 剥离出来的幼胚要立即接种到培养基上进行培养。 在培养之前必须对所培养的对象在自然发育条件下的特性充分了解，比如胚的休眠问题、是否需要春化作用、胚萌发的温度等。 2、幼胚的分离及培养 ①幼胚的剥离 ②幼胚的培养 胚胎发育过程分为两个时期： 1）异养期（heterotrophy period），即在胚发育早期，幼胚由胚乳及周围的组织提供养分。 2）自养期(autotrophy period) ，胚在代谢上已经能在基本的无机盐和蔗糖的合成培养基上生长，在营养上已相当独立。 Monnier(1976,1978)介绍了一种培养方法 胚乳看护培养 Ziebur等 (1951)报道，在进行大麦未成熟胚离体培养 时，培养基上存在来自同一物种另一种子的离体胚乳，对胚 的生长有明显的促进作用。 谷类胚胎嫁接的研究发现，当大麦胚移植到小麦的胚乳上 时，比在大麦胚乳上生长更好。 Kruse(1974)在某些属间杂交中，若把杂交未成熟的胚放 在事先培养的大麦胚乳上培养，能显著提高获得杂种植株的 频率。 大麦（Hordeum vulgare）×黑麦(Secale cereale)属间杂交，采用这种方法有30%～40%的杂种未成熟胚可以发育成苗，而用传统的胚培养法只有1%能成功。 （2）幼胚离体培养的生长发育方式 ①胚性发育(embryonal development) 幼胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。 ?②早熟萌发(early mature sprouting) 幼胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为早熟萌发（未经完成正常的胚胎发育过程而形成幼苗的现象叫早熟萌发）。 在大多数情况下，一个幼胚萌发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体，从而可以形成许多植株，这种现象就是所谓的丛生胚现象。 ③愈伤组织(callus) 在许多情况下，幼胚在离体培养中首先发生细胞增殖，形成愈伤组织。一般来讲由胚形成的愈伤组织大多为胚性愈伤组织，这种胚性愈伤组织很容易分化形成植株。 （3）离体幼胚培养的影响因素①培养基 胚的成熟程度不同，所用培养基的类型也不同。 成熟胚的培养基有：Tukey、White等。 未成熟胚有：Rijven、Nitch、MS等。 培养基的渗透压对幼胚培养至关重要，渗透压的调节主要依赖糖。 常用的是蔗糖，不同发育时期的胚要求蔗糖的浓度不同，胚龄越小，糖浓度要求越高。 确定适宜蔗糖浓度的方法是在接种前将幼胚剥出后放入若干浓度的蔗糖溶液中，观察质壁分离现象，以确定等渗溶液的浓度。 ②附加物： a、氨基酸类，无论是单一的还是复合的AA都能刺激胚的生长。最有效的是谷胺酰胺，常用的有甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸。水解酪蛋白（CH）是一种AA复合物，有抑制早熟萌发和促进未成熟胚发育的作用 b、维生素类。维生素对初期幼胚一般是必需的，但有时也有抑制作用，最好在实验证实后使用。 c、天然提取物。常用各种胚乳汁、酵母提取物 d、生长调节剂 ③ 环境条件 对于幼胚培养，初期弱光和黑暗更适宜，幼胚启动发育后给予和其自然光周期一致的光照条件有利于幼胚发育。 培养的温度 一般以该植物种子萌发的适宜温度为好。 ④培养材料 植物培养材料的基因型和胚发育程度对离体胚培养有重要影响。 材料基因型不同，胚培养的难易程度也不同。