微生物学检验-第3版2012不动杆菌与脑脊液.pptVIP

不动杆菌 革兰阴性球杆菌，单个或成双排列，有时呈丝状或链状；无芽孢、无荚膜，无鞭毛。 不动杆菌属的细菌进行革兰染色时不易脱色，有时易染成革兰阳性，误认为是革兰阳性球菌，应注意鉴别。 氧化酶: - O/F：O 硝酸盐还原: - KIA: K/K 动力：- 枸櫞酸盐利用: + 注意与形态相似的奈瑟菌鉴别；注意与不分解糖的产碱杆菌鉴别 * 脑脊液标本的微生物检查及不动杆菌的培养鉴定 * * 目的要求 1. 掌握脑脊液标本的细菌学检验和报告方法。 2. 掌握不动杆菌的培养特征、主要微生物特性及鉴定方法。 * 器材和试剂 1、标本：脑脊液标本 2、菌种：不动杆菌 3、培养基：血平板、中国蓝平板、巧克力平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培养基、非发酵菌微量生化管。 * 4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂 5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非发酵菌生化编码表等。 器材和试剂 * 由临床医师以无菌方法采集脑脊液1-3ml，置于无菌试管中立即送检。 标本的采集 * 脑脊液标本 离心沉淀 革蓝染色 显微镜观察 初步报告 抗酸染色 墨汁染色 血平板 巧克力平板 罗氏培养 沙保弱培养 菌落、形态、生化 血清学鉴定 药敏试验 最终报告 检验程序 * 1、涂片检查：将脑脊液3000r／min离心10-15min，取沉淀涂片。 1) 革兰染色镜检：如查见革兰阴性、凹面相对的双球菌，分布在细胞内或外时，可报告“找到革兰阴性双球菌，位于细胞内(外)，形似脑膜炎奈瑟菌”；如查见革兰阳性、矛头状的双球菌，有明显的荚膜存在，可报告“找到革兰阳性双球菌，形似肺炎链球菌”。进一步用肺炎链球菌全价血清做荚膜肿胀试验，阳性者报告“荚膜肿胀试验检出肺炎链球菌”。如查见其他革兰阳性、阴性细菌，则根据细菌形态和染色性，报告“找到革兰×性×菌”。 脑脊液标本检验操作流程及报告方式 * 2) 墨汁染色：用墨汁负染，在黑暗的背景中见到折光性很强的菌体及周围透明的宽大荚膜，有时可见到长出的单芽，可报告“墨汁负染找到宽厚荚膜的单芽细胞，形似新型隐球菌”。也可用O.1％甲苯胺蓝染色法，新型隐球菌菌体呈红色，荚膜不着色，白细胞深蓝色，红细胞不着色。 3) 抗酸染色：取沉淀做小而集中的涂片，用抗酸染色后镜检，发现有红色的抗酸杆菌，可报告“找到抗酸杆菌”。 脑脊液标本检验操作流程及报告方式 * 2、培养　普通培养：将脑脊液直接或经离心沉淀后，接种在血平板和巧克力平板上，分别放置在普通培养箱和5％-10％CO2培养箱中，35℃孵育18-24h。观察菌落形态，涂片染色观察。　　如为中等大小、半透明、灰蓝色、湿润的菌落，革兰阴性双球菌，氧化酶和触酶均阳性，只分解葡萄糖和麦芽糖，可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。就可参照 “奈瑟菌属”的鉴定。 脑脊液标本检验操作流程及报告方式 * 如在血平板上有草绿色溶血、扁平的小菌落生长，革兰阳性双球菌，触酶阴性，参照 “链球菌属”进行鉴定。　　如果怀疑新型隐球菌感染或直接涂片发现有新型隐球菌，则接种沙保弱琼脂或血琼脂平板分别于25℃及35℃培养，一般2-3天长出白色或淡褐色菌落。非致病性菌落35℃不生长。根据菌落形态、涂片染色、荚膜和生化反应等进行鉴定。参照 “隐球菌属”。　 如为其他形态的菌落和细菌，则参照相关均属进行鉴定。 如经3天的培养未见细菌生长，可报告“经3天培养无细菌生长”。 脑脊液标本检验操作流程及报告方式 * 革兰阳性细菌 革兰阴性细菌 球菌 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、消化链球菌 脑膜炎奈瑟菌、卡他布兰汉菌 杆菌 结核分枝杆菌、产单核李斯特菌 流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、产气肠杆菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、脑膜炎败血黄杆菌、类杆菌 其它 新型隐球菌、白色念珠菌 钩端螺旋体 脑脊液标本常见的分离菌 * 注意事项 1、标本采集应在抗菌药物使用前采取。 2、引起脑膜炎的细菌都比较娇嫩，容易死亡或自溶，因此应立即送检并尽快处理，最好床边接种。 流行性脑脊髓膜炎是法定传染病，从脑脊液中分离并鉴定出脑膜炎奈瑟菌，应按规定报告法定部门。从脑脊液中分离到的流感嗜血杆菌以B型菌为多，能产生TEM型β-内酰胺酶，对青霉素耐药，纸片法测定常不正确，需单独测定β-内酰胺酶。 * 3、脑膜炎奈瑟菌对外界环境抵抗力差，特别对寒冷和干燥敏感，因此要注意将标本在25-37℃保温，不可放置冰箱冷藏或低温保存。防止标本干燥和避免日光直接照射。 注意事项 * 一、脑脊液标本 分区画线接种到血平板、巧克力