[生物学]分子生物学实验技术01.pptVIP

分子生物学实验技术(畜牧) 主讲：李 亮 副教授 蒋岸岸 实验师 课程简介 课程目的： 掌握分子生物学的基本实验理论和方法 掌握常用仪器设备的使用方法 熟悉分子生物学相关资源和软件的应用 课程安排：共3-4周 理论 10-12学时 实验 28-30学时 课程考核： 独立完成一个完整的实验设计 课程内容 理论部分 （1）分子生物学实验必须掌握的基本理论、方法；核酸分离纯化及检测的原理与方法 （2）文献的查阅和管理；PCR原理及引物设计；DNA的多态性分析的原理及方法 （3）逆转录PCR原理；基因的克隆；基因的表达和调控研究；定量PCR原理及方法 课程内容 实验部分 （1）常用仪器的认识和使用；常用药品、试剂的配制、稀释、分装、贮存；动物基因组DNA的提取、检测与定量 （2）PCR扩增特定基因片段、非变性聚丙烯酰胺凝胶制备、SSCP电泳、凝胶染色分析 （3）动物组织RNA提取、检测及定量、逆转录、荧光定量PCR技术检测不同组织中特定基因的表达差异 第一讲 分子生物学实验基础 I. 必须掌握的基础理论 细胞中的遗传物质构成 DNA的结构、复制、中心法则 基因的结构和表达调控 DNA重组 1.细胞中的遗传物质构成 原核生物 核DNA 质粒DNA 真核生物 核基因组 细胞质基因组 线粒体DNA 质体DNA 真核生物染色体结构 真核生物的染色体组 2. DNA的结构、复制、中心法则 DNA结构 基本构成单位是核苷酸 核苷酸由脱氧核糖、碱基和磷酸构成 碱基分别是腺嘌呤 (A)、鸟嘌呤 (G)、胸腺嘧啶 (T)和胞嘧啶(C) 两个核苷酸以磷酸二酯键相连 进一步盘旋、折叠，形成三级 或四级结构 RNA：核糖、尿嘧啶(U) 真核生物基因的结构 多数基因是单独调控的 真核生物mRNA的结构 小结 深入、清楚的理解各种理论基础，在实验过程中才能够分析、理解、解决所遇到的问题 遗传物质 DNA、RNA 基因的结构和表达调控 DNA重组 II. 应该掌握的基本实验技术 必须掌握的基本技术 常用仪器的基本原理及使用 核酸纯化技术 核酸定量技术 凝胶电泳技术 分子杂交技术 序列分析技术 …… 做实验的一些好习惯 实验之前看资料的时候，最好归类存放，看过后记下重点内容，并将出处标明，以免日后找不到！ 认真做好实验前的准备工作，包括试剂、仪器的准备，实验方法的确定，请教一下做过类似实验的人！认真做好实验设计！实验前最好做一个实验流程图！ 最好在有部分实验数据出来时，就着手写文章！在写文章的时候，可以清晰自己的思路，知道后面该先做什么，该重点做什么！ 实验前多想想，不要着急动手，在脑子里把全部的实验过程过一遍，尽量做到一次成功！不要想着这一次做不出来再做一遍，这样永远都做不好实验！ 做实验的一些好习惯 先写实验步骤再做实验，实验的间隙注意写下实验现象的描述，实验后注意实验数据的整理和分析！ 做实验时要平心静气，注意细节，认真记录，因为失败时常事，不要回过头不知道该从哪里找原因！ 试剂最好自己配，并注明时间和谁配的，实验室中每个人都应该有个单字母缩写的名字！ EP管上一定要做好标记，写上日期，同时记录本上应该有详细的情况！ 重要的东西可以再加贴一张标签纸，在冰箱中反复冻融会使字迹模糊，可以再用透明胶带纸贴在字外面！ 做实验的一些好习惯 不随意用别人的东西，用时先打招呼！ 注意自己的安全！注意他人的安全！注意实验室的安全！ 要靠自己，但也要多交流！多和大家讨论，同时多关注别人实验的经验! 维持良好的人际关系和舒适的实验环境！ 改条件时，一次最好只改一个实验条件！ 做完实验，清洁实验台面，以便下次能够更快、更好，更方便的继续工作！ 离开实验室前注意水，电、门窗是否安全！ 常见仪器设备及使用 危险装置的使用 仪器设备使用注意事项 使用前先通过阅读说明书、请教他人以掌握使用方法！随便进行操作，容易引起大事故！ 对不了解其性能的装置，使用时要认真进行仔细的准备，尽可能逐个核对装置的各个部份，尽量掌握该仪器的操作原理 使用高温、高压、高压电、高速度及高负荷之类装置时，必须做好充分的防护措施，谨慎地进行操作 使用后要收拾妥善！如果发现有不妥当的地方，必须马上通知管理人员进行处理！ 大型设备必须按要求做好使用登记！ 小结 熟悉实验室各种仪器设备 功能 使用方法 注意事项 在设计自己的实验时应该考虑充分利用现有各种设备 维护实验室环境、安全 实验室常用仪器设备使用 微量移液器 不能将刻度调节到移液器量程之外 安装枪头时，不要使劲垂直上下敲击，应该左右旋转使枪头套紧 吸取液体时，只推至第1档，释放液体时，推至第1档后停1～2秒后推至第2档 较长时间不用(如过夜)，一定要把移液器调回最大量程，以免压缩弹簧导致弹簧不能回复 移液器必须卸