脑微血管内皮细胞的原代培养方法概述-中国药理学通报.PDFVIP

·２９４· 中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１３Ｆｅｂ；２９（２）：２９４～６ 网络出版时间：２０１３－１－２８８：４０　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ０８４０．０３４．ｈｔｍｌ ◇小专论◇ 脑微血管内皮细胞的原代培养方法概述 王　艳，汪　宁，林辰雨 （安徽中医学院·安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥　２３００３１） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１３．０２．３４ 验进程，因此要求操作者细心准确的剥离软脑膜和脑膜大血 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１３）０２－０２９４－０３ 管，近期有研究者采取无菌干滤纸上滚动的方法有效降低杂 中国图书分类号：Ｒ０５；Ｒ３２２．１２；Ｒ３２２．１３；Ｒ３２２．８１；Ｒ３２９．２ 细胞的污染［５－７］，此方法在运用中，效果明显。 摘要：脑微血管内皮细胞 （ｂｒａｉｎｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ２　脑微血管段的分离　 ｃｅｌｌｓ，ＢＭＥＣｓ）是构成血脑屏障的主要成分，与脑水肿、脑缺 ２．１　非酶法　为有效分离脑微血管段，不同的操作者选取 ［８］ 血以及脑肿瘤等脑血管疾病的发生、发展密切相关。ＢＭＥＣｓ 方法不同。李臖等 采用金属漏网研磨再匀浆的方式。李 ［９］ 原代培养模型已被广泛应用于血脑屏障、脑血管疾病的病 晓宇等 依次将细胞悬液过 １００目和２００目尼龙筛，最终 ［１０］ 理、生理及分子生物学研究。该文对近年来国内外有关 收集２００目尼龙筛上的组织进行操作。Ｇｅ等 将两种方 ＢＭＥＣｓ原代培养的方法进行综述，为脑血管疾病的研究提 法结合，先匀浆再过滤。在比较了以上不同方法后发现组织 供基础。 匀浆和过筛的方式虽能有效去除杂细胞，但是对细胞活力损 害较大，而且细胞的数量大幅度减少，因此一次实验需消耗 关键词：脑微血管内皮细胞；细胞原代培养；分离；纯化；鉴定 大量的实验动物。在近期，有研究发现组织块内不同细胞的 迁出速率不同，在７２～９６ｈ以内皮细胞为主，因此可以采用 ［１１］ 　　脑微血管内皮细胞（ｂｒａｉｎｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ， 组织块法培养 。此方法相较于匀浆、过筛，周期比较长， ＢＭＥＣｓ）是构成血脑屏障的主要成分，其能通过选择性双向 但是在实践后证实对组织损伤小，细胞获得率高，实验动物 跨细胞膜转运系统及细胞间的紧密连接将脑组织与体循环 消耗少。 ［１］ ２．２　酶消化法　酶消化法最常用的是胶原酶［１２－１５］，原因在 分隔开，限制蛋白质和大多数极性分子进入脑 。如果 ＢＭＥＣｓ及其紧密连接的结构和功能受损，可能导致脑水肿、 于其能松解内皮细胞与基底膜之间的联系，并进一步破坏紧 ［２－４］ 密连接。据此，有学者首先用 型胶原酶消化使脑微血管段 脑缺血以及脑肿瘤等疾病的发生 。目前，原代培养的