测定小米.pptxVIP

小米中主要营养成分的测定 小米营养丰富，含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质等人体必需的 营养物质。本实验测定小米中蛋白质含量。 小米中蛋白质的测定 一、实验原理  蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数，即得蛋白质含量。 因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。 小米中蛋白质的测定 三、仪器与试剂  硫酸铜（CuSO4·5H20）   硫酸钾    硫酸（密度为1.8419g/L）   硼酸溶液（20g/L）： 称取20 g硼酸，加水溶解后并稀释至1000 mL 氢氧化钠溶液（400g/L）   0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。  混合指示试剂：0.1%甲基红乙醇溶液液1份，与0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份 临用时混合。                           1、电炉；  2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）； 3、螺旋夹a；  4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）； 5、反应室； 6、反应室外层；  7、橡皮管及螺旋夹b； 8、冷凝管； 9、蒸馏液接收瓶。  小米中蛋白质的测定 小米中蛋白质的测定 1－电炉； 2－水蒸气发生器（2 L烧瓶）； 3－螺旋夹； 4－小玻杯及棒状玻塞； 5－反应室； 6－反应室外层； 7－橡皮管及螺旋夹； 8－冷凝管； 9－蒸馏液接收瓶。 实验步骤 1、预处理 将15份谷子脱壳、粉碎过60目（即250微米）筛子，置于105℃烘箱中干燥2h。 干燥后的样品保存于干燥器中，待测。 小米中蛋白质的测定 2、样品消化  称取样小米粉约2.00g，移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾(做催化剂，加速分解过程)，稍摇匀后瓶口放一小漏斗（避免样品粘在瓶颈上，以免消化不彻底），加入20mL浓硫酸，将瓶以45角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，（去除其他干扰物质，糖，脂肪等），再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，(浓硫酸具有脱水性和氧化性,使有机物炭化呈黑色，待有机物全部被消化完后，不再有硫酸亚铜生成，溶液呈现清澈的蓝绿色），继续加热0.5h(时间过长会引起氨的损失），取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。  试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。 小米中蛋白质的测定 3、定氮装置的检查与洗涤  检查微量定氮装置是否装好。在蒸气发生瓶内装水约三分之二，加甲基红乙醇指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，（碱性条件下，除了色氨酸的其他氨基酸都会被破坏，所以要保持酸性，而酸性条件下仅仅色氨酸会被破坏）。加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。  测定前定氮装置如下法洗涤2~3次：从样品进口入加水适量（约占反应管三分之一体积）通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子（ 3－螺旋夹），使反应管中的废液倒吸流到反应室外层，打开橡皮管（ 7－橡皮管及螺旋夹）排出，如此数次，即可使用。 小米中蛋白质的测定 4、碱化蒸馏  量取硼酸试剂（吸收液，将氨气固定于吸收液中，形成硼酸铵）20mL于接收瓶中，加入混合指示剂2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夹a （ 7－橡皮管及螺旋夹)关闭，螺旋夹b （ 3－螺旋夹）开启的状态下，准确吸取10.0mL样品消化液，由小漏斗流入反应室，并以10mL蒸馏水洗涤进样口流入反应室，棒状玻塞塞紧。将10mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，（加入氢氧化钠中和硫酸,使溶液呈碱性,才能放出氨，消化液中的硫酸铜作用，分离蛋白质），提起玻塞使其缓缓流入反应室，用少量水冲洗立即将玻塞盖坚，并加水于小玻杯以防漏气，开启螺旋夹（ 3－螺旋夹），关闭螺旋夹（ 7－橡皮管及螺旋夹），开始蒸馏。通入蒸汽蒸腾10min后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馏2min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部（使蒸馏物质全部流入接受瓶中），取下接收瓶，准备滴定。最后灭火。  同时吸取10.0mL试剂空白消化液按上法蒸馏操作 小米中蛋白质的测定 5、样品滴定  以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至绿色为终点。用于滴定，与硼酸铵反应。 由选用的混合指示试剂决定，颜色由酒红色变成绿色，ph5.1。 小米中蛋白质的测定 6、数据记录 项目 第一次 第二次 第三次 样品消化液（ml） 10 10 10 滴定消耗盐酸标准溶液（mL） 消耗盐酸标准溶液平均