卢氏鸡白细胞介素21的克隆与生物信息学分析.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 在鸡体内具有ChIFN．仅和ChⅡ，2的双重生物学活性。 NDV、AⅣH9N2和IBDv都是对养鸡业危害严重病原，临床上鸡群一旦发生这些疫病时均没 及IBDV在细胞上、鸡胚内或鸡体内的增殖，这为临床这三种病防治提供了一种新方法和思路，对防 控ND、IBD和AⅣ病等病毒性疾病具有重要意义。 本研究成功构建了国，肼弘f胁妇r-吼，L-2嵌合基因并对其进行了原核表达，对表达的融合 和鸡体内都具有ChIFN．仅和ChIL．2蛋白的双重生物学活性。本研究为下一步将 疋llI]FN．a．1inke卜Ch几．2蛋白用于临床鸡体抗病毒感染研究奠定了基础。 ◆考文献膏 卢氏鸡白细胞介素21的克隆与生物信息学分析 张旭张春杰‘程相朝李银聚吴庭才郁川 王学强冯运巩 (河南科技大学，动物科技学院，洛阳，471003) 摘要本实验设计一对特异性引物，从卢氏鸡淋巴细胞中扩增Ⅱ，21全基因并测序，详细分析该基因及其编码蛋 白的各级结构。结果表明，成功克隆具有中国地方特色的卢氏鸡IL21基因，该基因全长438b口，编码145个氨基酸， 蛋白，具有亲水性，无二硫键；三维结构预测表明，卢氏鸡m．21蛋白主要由四个a螺旋和不规则卷曲构成，与人 IL．21蛋白三维结构相似；同源性分析表明，该序列与其他动物儿．2l的氨基酸同源性低于35％． 关冀词卢氏鸡；白细胞介素2I；克隆；结构；分析 白细胞介素21(interleu虹ne 一段编码I类细胞因子受体的cDNA序列，将其编码的蛋白质命名为白细胞介素21受体(几．2lR)， 随后从活化的人cD3+T细胞中成功克隆出了m一2l基因，由此拉开了IL一2l的研究序幕。 也．21具有广泛的生物学功能，它能够刺激T淋巴细胞、NK细胞的增殖分化和CD40特异性 应答B细胞的增殖，能够增强NK细胞的杀伤活性并能促进其合成IFN一1，，而且还可提高并维持 CD+8 T细胞对抗肿瘤免疫的持久应答，从而在宿主防御、抗瘤抑瘤等方恧具有重要作用【2】。因此， IL一21作为一种新型的免疫调节剂和免疫佐剂，具有较大的潜在的应用前景。目前，已成为国内外研 究的焦点。 中收录有鸡几一21序列，但迄今未见相关文献的报道。本试验根据GbnBank中鸡儿一2l的核苷酸序 列，设计l对特异性引物，成功克隆了卢氏鸡IL．2l全基因。并且对该基因及编码蛋白进行了各种 分析，构建了鸡几．21蛋白三维结构模型，分析了与其他动物IL．21的遗传进化关系，为进一步研 究禽类几．2l的结构和功能奠定了良好基础。 1材料 1．1实验动物、载体与宿主菌 JMl09受体 卢氏鸡购自河南三门峡卢氏县某鸡场。pMD18一T载体购自大连宝生物公司；E．coh 菌为本实验室保存。 1．2工具酶与主要试剂 Hindm、BaInHI，1、vo PCR S卸RNAKit(AMV)，TaqDNA聚合酶，DL2000Marker，均购 自大连宝生物公司：凝胶回收试剂盒，质粒提取试剂盒均购自上海捷瑞公司；RPMI1640培养基购 自GIB．cO公司； ConA购自Sigma公司。 1．3引物设计与合成 I，HindIⅡ 参照GeIlBaIlk中的鸡几．21基因序列，设计l对特异性引物，5’端分别引入B觚m 酶切位点，由上海生工生物工程有限公司合成。 上游：5’．CGGG△巡ATGGAGAGGAT．GAr：口Ⅱ’rTrCl一-3’ 123l 禽类传染病一其他 下游：5’一CCC△△鳗郾AAAl除GTAGAlTrrCCG，I’AG一3’ 2方法 2．1 目的基因的诱导与总RNA提取 无菌采血，分离淋巴细胞，用心)MI Reagent的步骤提取卢氏鸡淋巴细胞的总RNA。 2．2目的基因获取