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ELISA检测HBsAbPPT
免疫标记技术 湖北科技学院免疫教研室 免疫标记技术是用荧光素、酶、或者放射性核素等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行的抗原抗体的反应。 概 念 细胞1 细胞2 标记物 分 类 荧光素 放色性核素 酶 放射免疫技术 免疫荧光技术 酶免疫技术 酶免疫技术 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。 可用酶标测定仪测定光密度（OD）来反应抗原或抗体含量，灵敏度可达到ng-pg/ml水平。 酶具有高效催化性：可以加快化学反应的速度 ；在反应前后，没有质和量的改变；微量的酶便可发挥巨大的催化作用。 无色 有色 酶免疫技术 酶联免疫吸附试验 酶免疫组化法 用于检测可溶性抗原或抗体 用于检测组织中或细胞表面的抗原 酶联免疫吸附试验-ELISA 间接法 双抗体夹心法 乙肝表面抗体ELISA检测 检测对象：乙肝表面抗体HBsAb 检测试剂：乙肝表面抗原HBsAg、酶标乙肝表面抗原HRP-HBsAg 酶促反应：辣根过氧化物酶HRP催化四甲基联苯胺TMB由无色显蓝色 定性：判断有无颜色变化 定量：用酶标仪检测光密度值，灵敏度可达0.5ng/ml水平 实验原理 乙肝表面抗体ELISA检测 操作步骤 1.从冰箱取出试剂盒，室温平衡30分钟。 2.按如下方式加待测血清，每孔1滴。 待2 待3 待1 阳性 阴性 空白 3.每孔加酶结合物1滴（孔上方悬空滴加，无气泡），混匀，空白孔不加，置37度温箱30分钟。 4.取出反应板，弃液，拍干。 5.每孔注满洗涤液，（不要溢出）静置5秒后弃液，拍干，重复洗涤5次，拍干。 6.每孔加显色剂A和B各1滴，置37度温箱15分钟。 7.每孔加终止液1滴混匀，观察结果。 结果观察 结果观察 乙型肝炎病毒采用ELISA检测法具有操作简便、灵敏度高、试剂成本低、环保和适用于大批量人群抗原、抗体筛查等优点,目前在国内实验室被广泛使用。 缺点易产生假阳性结果。 酶标仪洗板机 排枪加样 酶标仪
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