药典2010年版二部色谱法讲义.ppt

V D 高效液相色谱法 系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 V D 高效液相色谱法 (1) 色谱柱 反相 (非极性:C18、C8、CN、NH2)(组分的出峰顺序：极性大的先出峰，极性小的后出峰。 ) 正相 (极性：硅胶)主要用于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物(极性：固定相流动相) 离子交换 分子排阻 对映异构体 V D 高效液相色谱法 (1) 色谱柱 除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10μm之间，粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。 使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。 V D 高效液相色谱法 (2) 检测器 选择性 紫外、荧光、电化学 通用型 蒸发光散射、示差折光 V D 高效液相色谱法 (3) 流动相 反相色谱系统的流动相首选甲醇-水系统(采用紫外末端波长检测时，首选乙腈-水系统)，如经使用不合适时，再选用其他溶剂系统。应尽可能少用含有缓冲液的流动相，必须使用时，应尽可能选用含较低浓度缓冲液的流动相。 其中，调整流动相组分比例时，以组分比例较低者(小于或等于50%)相对于自身的改变量不超过±30%且相对于总量的改变量不超过±10%为限，如30% 相对改变量的数值超过总量的10%时，则改变量以总量的±10%为限 。 V D 高效液相色谱法 系统适用性试验 理论板数 分离度 重复性 拖尾因子 V D 高效液相色谱法 测定法 内标法 外标法 加校正因子的主成分自身对照法 不加校正因子的主成分自身对照法 面积归一化法 司帕沙星 P221 消旋山莨菪碱 P866 硫酸卡那霉素 P967 氨基糖苷类抗生素 蒸发光散射检测法 阿米卡星 P388 柱前衍生化法 V E 气相色谱法 系采用气体为流动相(载气)流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物气化后，被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，用数据处理系统记录色谱信号。 V E 气相色谱法 载气源 进样部分 色谱柱 柱温箱 检测器 数据处理系统 V E 气相色谱法 检测器 应用 火焰离子化检测器（FID） 有机化合物 热导检测器（TCD） 无机气体、有机化合物 氮磷检测器（NPD） 氮、磷化合物 火焰光度检测器（FPD） 硫、磷化合物 电子捕获检测器（ECD） 卤素等化合物 质谱检测器（MS） 结构确证 V E 气相色谱法 各品种项下规定的色谱条件，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。一般色谱图约于30分钟内记录完毕。 V E 气相色谱法 测定法 内标法 外标法 面积归一化法 标准溶液加入法 (当采用顶空进样时，由于供试品和对照品处于不完全相同的基质中，故可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响；当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时，应以标准加入法结果为准。) 对于生产过程中引入的有机溶剂，应在后续的生产环节予以有效去除。除正文已明确列有“残留溶剂”检查的品种必须依法进行该项检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项检查的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的限度规定。（凡例 十七） V E 气相色谱法 头孢泊肟酯 P198 残留溶剂 V F 电泳法 是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶)中，在电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱并计算其含量的方法。 V G 毛细管电泳法 是指以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据供试品中各组分的淌度(单位电场强度下的迁移速度)和(或)分配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。 盐酸头孢吡肟 P671 V H 分子排阻色谱法 是根据待测组分的分子大小进行分离的一种液相色谱技术。分子排阻色谱法的分离原理为凝胶色谱柱的分子筛机制。 头孢拉定 P195 V J 离子色谱法 系采用高压输液泵系统将规定的洗脱液泵入装有填充剂的色谱柱进行分离的色谱分析方法。