液相色谱工作原理.pptVIP

液相色谱仪器结构组成示意图 溶剂传输泵 溶剂传输泵的要求 能在高压下连续工作 较宽的可程序控制的流速范围 耐化学腐蚀 无脉动输出 输出流量稳定、重复性好 易安装维护 溶剂输出泵—柱塞泵 溶剂输出泵—往复泵 往复泵的工作原理 并联往复泵的工作原理 理论检测限估算 摩尔吸光系数ε（A =εb c） 紫外检测器灵敏度很大程度取决于样品的 ε值 ε 与物质分子结构有关 估算最低检测浓度 Cmin Cmin=3ND/εb（ND噪声） 摩尔吸光系数影响检测灵敏度 估算最小检测量 Mmin Mmin = Cmin x进样体积 二极管阵列检测器 光学特性 光电二极管阵列 汞灯波长校正 棱镜分光系统 二极管阵列检测器的数据分析功能 荧光检测器 原理 物质吸收特征频率的辐射，跃迁到高能级 从高能级状态向低能级，发射出比吸收波 长更长的特征辐射 荧光检测器光学系统 ProStar 363 荧光检测器 示差折光检测器 通用型检测器 溶剂选择合适几乎可测所有的物质 原理 折射率：光在真空的速度和在某介 质中的速度之比光 光由一种介质进入另一种介质时发 生折射现象 折射率随温度升高而降低 同一介质对不同波长的光有不同折射率 示差折光检测器光学系统 温度控制 维持参比、样品池温差最小 采用热交换器、利用热平衡控制温度 避免室温变化的影响 示差折光检测器的特点 属通用型检测器 响应值取决于柱后流出液折射率变化 适合检测 无紫外吸收的物质 流动相溶剂具有高紫外吸收 浓度敏感型检测器 响应信号与溶质浓度成正比 中等灵敏度检测器 不适合痕量分析 示差折光检测器的特点（续） 对压力、温度变化相当敏感 需配置柱温箱 最常用的溶剂是水 不适合梯度洗脱 检测要求 流动相组成须恒定 控制恒温 控制压力恒定 出口处不可以加限流 装置 检测器串联时，RI应 放在最后 蒸发光散射检测器 蒸发光散射检测器（Evaporative Light-scattering Detector）是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如如人参皂苷、黄芪甲苷等。1993才由Alltech公司商业化生产。 ELSD工作原理 恒定流速的色谱仪洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室，流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。 蒸发光散射检测器 Q / A * CONFIDENTIAL CONFIDENTIAL 液相色谱工作原理 流动相储液瓶 单元或多元泵 梯度混合器 预柱 手动-进样器 自动-进样器 保护柱 色谱柱 柱后反应器 柱温箱 检测器 馏分收集器 积分仪 工作站 计算机 接口 温度控制单元 样品制备单元 步进电机 齿轮变速箱 活塞 液体 到色谱柱 密闭输液系统 工作过程：步进马达带动活塞输液 优点：流速恒定，无脉冲 缺点：输液泵缸溶剂有限 活塞与液缸间密封要求高，更换溶剂不方便 造价高 工作过程：电机带动偏心轮，驱动活塞往复运动 在高压下连续以恒定的流量输送液体 优点：溶剂不受限制 死体积小 溶剂混合均匀 缺点：会产生脉冲 需增加脉冲阻尼器 溶剂进入： 活塞收回、腔内形成低压 入口阀打开，出口阀感应压差而闭合 溶剂输出： 活塞推出、腔内压力增加 出口阀打开，入口阀感应压差而闭合 单向阀的特点： 密封性能相当好 可以非常敏感地感应压差而迅速闭合 进样阀 六通阀设计 耐高压，低死体积 可以手动或自动旋转进样阀 自动进样的重复性优于手动进样 上样(load)状态 进样(inject)状态 手动进样阀的进样 注意：一定使用平头微量进样针 进 样—层 流 效 应 当样品注入定量环时，环中的流动相将被取代 样品于流动相之间的界面呈抛物线状，称为层流效应 全定量环进样时，必须考虑层流效应的影响 进 样—层 流 效 应 以定量环的体积定量 对一般样品而言，进样体积需大于定量环的2.5倍 4 倍则更加保险 倍数 进 样—进 样 量 全定量