医学科研型博士 蛋白质课程 值得学习，华山中心实验室任教授.ppt

蛋白质组学研究目的 研究细胞产生的蛋白质以及在不同生理病理情况下这些蛋白质的改变 蛋白质组学 前处理技术 研究蛋白质组学的方法 双向凝胶电泳 Two-dimensional electrophoresis, 2-DE 蛋白质芯片系统 Protein chip 同位素亲和标签 Isotope-ceded afinity tags, ICAT 胶上差示电泳 Diferential in gel electrophoresis, DIGE 多维色质联用 Multidimensional liquid chromatography and tandem spectrometry, MudLC MS／MS 蛋白质组学的技术核心 双向电泳和质譜技术 1 双向电泳原理 等电聚焦：利用不同的蛋白质所携带的电荷不 同，在电场作用下，使其泳动至本身电荷为零 （即等电点）而得以分离。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：利用不同蛋白质 的分子量不同，在电场作用下，经分子筛的分筛 而得以分离。 影响因素：蛋白质的氧化、磷酸化、修饰、降解、 聚合、辅基化或去辅基化等。 双向电泳操作 蛋白质提取 等电聚焦 SDSOH－ H+ 12 20 30 45 68 96 OH- H+ 3.5 5.4 6.6 7.8 8.5 等电聚焦（Isoelectronic focus) 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS） 基质辅助激光解吸离子飞行时间质谱 （MALDI-TOF-MS） 将样品溶于一个固体底物中形成晶体,采用脉冲激光轰击,使其离子化,加速离子通过飞行管使其得以分离并被检测。 肽指纹图谱（ Peptide Mass Fingerprinting, PMF）测定 是对蛋白酶解或降解后所得多肽混合物进行质谱分析的方法，对质谱分析所得肽片与多肽蛋白数据库中蛋白质的理论肽片进行比较，从而判别所测蛋白是已知还是未知。由于不同的蛋白质具有不同的氨基酸序列，因而不同蛋白质所得肽片具有指纹的特征。 Functional Assays ? Produce antibodies ? Perform Localization assays ? Perform Functional assays ? Develop New Proteomics Assay Technologies New Proteins or Interactions ? Perform Theoretical Characterization ? Examine Protein - Protein Interaction Map ? Pick key proteins to study ? Express and Purify Proteins Functional Assays - Produce antibodies - Perform Localization assays - Perform Functional assays - Develop New Proteomics Assay Technologies New Proteins or Interactions - - Perform Theoretical Characterization - - Examine Protein - Protein Interaction Map - - Pick key proteins to study - - Express and Purify Proteins Data Storage Tools and LIMS Protein Identification and Virtual Characterization Data Analysis Tools BIOINFORMATICS Data Storage Tools and LIMS Protein Identification and Virtual Characterization Data Analysis Tools Data Storage Tools and LIMS Protein Identification and Virtual Characterization Data Analysis Tools BIOINFORMATICS Mass Spectrometry - Acquisition of Data - Production of Mass Spectra Gel - 2D