输血前后患者体内抗II型碳酸酐酶抗体水平的改变.docVIP

精品论文 参考文献 输血前后患者体内抗II型碳酸酐酶抗体水平的改变 谭春泽（广西桂林市第一八一医院输血科 广西桂林 541002） 【中图分类号】R457.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2010）08-029-02 【摘要】目的 对因手术、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血三种疾病而输血的患者血清抗II型碳酸酐酶抗体水平进行研究。方法 使用ELISA法检测患者输血前后的血清抗II型碳酸酐酶抗体水平，同时对正常对照人群进行测定以确定其cut off值。结果 因手术输血后患者的血清抗II型碳酸酐酶抗体水平与输血之前相比无显著性变化；再生障碍性贫血和自身免疫性溶血患者输血后血清抗II型碳酸酐酶抗体水平较输血前显著升高。结论 对接受输血尤其是长期输血的患者应监控其自身免疫状态，以期减少或避免因自身免疫而造成的额外损伤。 【关键词】自身免疫 自身抗体 抗II型碳酸酐酶抗体 输血是临床治疗中常用的治疗和抢救手段，对疾病的治疗具有重要的意义。人的血型十分复杂，同种异体输血，尤其是输注全血时，将有大量的抗原进入受血者体内，容易刺激机体产生相应的抗体。II型碳酸酐酶是红细胞内重要的功能蛋白质，本研究着眼于观测输血前后患者血清中抗II型碳酸酐酶抗体水平的变化，从这一角度探讨输血对自身抗体的产生所造成的影响。 1 材料和方法 1.1 仪器与试剂 Thermo Labsystems MK3酶标仪，Thermo Labsystems MK2洗板机，Greiner bio-one酶标板。II型碳酸酐酶标准品购自Sigima公司，抗II型碳酸酐酶抗体购自Rockland公司，碱性磷酸酶标记的抗IgG抗体购自上海生工生物工程技术服务有限公司，四甲基联苯胺购自北京赛驰生物技术有限公司，其余试剂为国产分析纯。 1.2 ELISA 溶液系统 包被缓冲液（pH 9.6 碳酸盐缓冲液，0.05 mol/L），洗涤缓冲液PBST（pH 7.4 磷酸盐缓冲液，0.01 mol/L，含0.05%吐温-20），封闭液（含0.5 %牛血清白蛋白的PBST），底物溶液（1g/L pNPP，含0.05 mol/L Na2CO3和0.05 mmol/L MgCl2），终止液（2mol/L NaOH 溶液）。 1.3 间接ELISA法检测II型碳酸酐酶抗体 ①CA II包被酶标板（5mu;g/ml），包被的酶标板保鲜膜封好，置于4℃过夜。②酶标板每孔中加入50 mu;l洗涤缓冲液，重复清洗5次。③每孔中加入50 mu;l封阻缓冲液，于室温下放置30 min，用洗涤液洗板5次。④待测血浆样品封阻液稀释100倍，取50 mu;l加到包被孔中，使用正常人血清和样本稀释液分别作为空白对照和阴性对照，37℃放置1.5 h。⑤洗涤缓冲液清洗5次，每孔加入50 mu;l封阻缓冲液，室温放置30 min。⑥洗涤缓冲液清洗5次，每孔加入封阻液稀释的二抗50 mu;l，37℃放置2 h。⑦每孔中加入75 mu;1底物缓冲溶液，37℃反应30 min。⑧每孔加入25 mu;l终止液，终止水解反应。⑨酶标仪405 nm处读取OD值。⑩结果判定，使用阴性对照值＋2SD作为cut off值，测定结果高于cut off值者判定为阳性，实验结果使用OD值表示。 1.4 病例选择 随机选取我院心血管手术患者50例，其中男性30例，年龄为50～60岁，平均年龄53岁；女性20例，年龄为50～60岁，平均年龄55岁，上述患者均无自身免疫病病史。随机选取我院再生障碍性贫血患者30例，其中男性17例，年龄为30～40岁，平均年龄33岁；女性13例，年龄为30～40岁，平均年龄37岁。上述患者均无自身免疫病病史。选取我院自身免疫性溶血性贫血患者3例，其中男性1例，年龄为30岁，女性2例，年龄分别为27岁、28岁。同时分别随机选取各个年龄段??健康体检者共100名作为阴性对照（男女各半）。所有患者均为确诊病例，所有受试者均经知情同意。受试患者于输血前采血检测血清抗II型碳酸酐酶抗体水平，于输血后第三周再次抽血检测血清抗II型碳酸酐酶抗体水平。 1.5 统计学分析 使用SPSS 11.5统计软件进行one-way ANOVA方差分析和t检验，P＜0.05认为有统计学意义。 2 结果 2.1 健康体检受试者血清抗II型碳酸酐酶抗体的测定结果 随着年龄的增加，健康体检受试者血清抗II型碳酸酐酶抗体水平呈增加趋势，其中50-60岁组血清抗II型碳酸酐酶抗体水平显著高于10-20岁组和20-30岁组（P＜0.05），其他各组间测定结果