FCM(流式细胞术检测)原理及临床应用.pptVIP

FCM的工作原理 流式细胞仪组成： 1.液流系统 2.光学系统 3.数据处理系统 鞘液：辅助样本流能被正常检测的基质液 作用： 1.包裹在样本流的周围，使其处于喷嘴中心，以保证检测的精确性； 2.防止样本流中的细胞靠近喷孔壁而堵塞喷孔。 2.光学系统：由激发光源、分光镜、光束成形器等组成。 激光是较常用的光源, 稳定性好、单色性好。 检测信号： 散射光和荧光信号被收集、处理、转化为数字信号。 FCM检测信号 散射光信号 前向散射光（foword scatter, FS）：在激光束正前方的检测器，用于检测细胞或其他粒子物体的表面属性，如大小、形状等。反映细胞颗粒的大小。 侧向散射光（side scatter， SS）：与激光束垂直方向的检测器为侧向检测器，主要用于检测细胞内部结构属性，可获得细胞内超微结构和颗粒性质的参数。反映颗粒的内部结构复杂程度、表面的光滑程度。 荧光信号 (反映被染上荧光的细胞数量多少） 荧光信号 每种荧光染料都有特定的激发波长，受激光激发后会产生特定波长的荧光和颜色，如绿色、红色、黄色等。流式细胞仪就是利用不同波长的光学滤片来检测这些特定发射波长的光学信号。 荧光信号反映被染上荧光的细胞数量多少。 3.数据处理系统：主要由计算机及其软件组成。 通过检测散射光及荧光信号对实验数据进行分析 存储、显示。 具有智能化、自动化特点。 免疫荧光标记 直接免疫荧光染色法：选用荧光标记的McAb是直接针对细胞表面抗原特异性标志的单一抗体,如抗CD3-FITC抗体、抗CD4-PE抗体、抗CD8-PeCy5抗体。 间接免疫荧光染色法：选用特异性McAb与相应抗原结合后，再用荧光素标记的第二抗体进行染色。 双标记或多标记分析：目前使用的流式细胞仪能用一个激光束激发检测三色甚至四色荧光信号。检测时需注意荧光补偿。 常用免疫荧光染料组合 荧光补偿： 每两种荧光信号间不可避免会出现重叠现象，重叠区越大，信号检测的准确性就越差，因此需计算机工作软件进行自动跟踪调节补偿。 免疫分型的临床意义 ? 弥补FAB分型的不足 ? 诊断其他血液系统肿瘤 ? 诊断仅表达个别非本系列相关抗原的急性 白血病（LY+—AML、MY+—ALL） ? 急性双系或双表型白血病的诊断 ? 骨髓增生异常综合征（MDS）免疫表型分析的临床意义 ? 免疫分型对鉴别慢性淋巴细胞增生性疾病各亚型亦有肯定的诊断价值 以下为各系列较特别的标志： AML： MPO、 CD33、 CDl3、 CDl4 CDl5、 CDllb、 CDllc T-ALL： c／mCD3、 CD2、 CD5、 CD7、 CD4／CD8、 CD38 B-ALL： cCD22、cCD79、 CDl9、 CDl0、 CD24、 HLA—DR、 CD20、 CD38 造血干／祖细胞: CD34、 CDll7、 CD38、 HLA-DR、 ACl33 在AML各亚型的免疫分型中有时仍较难分辨，有以下特点可供参考： ①CD41、CD61是巨核细胞的标志，见于FAB—M7，但 血小板粘附于某细胞上可造成假阳性。 ② CD71与血型糖蛋白是红系的标志，见于FAB—M6型。 ③ CDl4、 CD64是单核细胞的标志，见于M4或M5。 ④ FAB—M3，t(15；17)者典型的免疫表型是CDl3+、 CD33+、 CD9+、 CD38+、 CD34-、 DR-。 ⑤ t(8；21)M2的表型为 CDl3+、 DR+、 CD34+、 CD33+、 CDl5+、 CDl9+或CD56+。 ⑥ M0与M1较难区分，应有髓系标志而无淋系标志，胞浆MPO应阴性。 CD34及DR在M0较强，并可伴有CD7与CD4。 ⑦ CDll7+多见于AML。 ⑧ CD7常与CD34共表达， CD4见于M4、M5。 CD2+见于M4Eo，往往伴有16号染色体异常。 M3亦可有 CD56+表达。正常粒细跑可表达 CDl0。由此可见，单抗本身有其多向性，勿轻易判断为杂合型白血病。 ⑨ T／B—ALL可分为几个亚型，然而对临床价值不大。但若B—ALL伴有CD34表达时，应进一步作遗传学与基因检测，以确定是否是Ph+ALL，不论是M—bcl/abl或m-bcr／ablmRNA阳性者，其预后均较差，应接受大剂量化疗或早期接受异基因骨髓移植。 * * 流式细胞术检测原理及在 临床医学中的应用 流式细胞术(flow cytometry FCM)是利用流式细胞仪对