病原生物学课件第二十章病毒感染的诊断与防治-0.pptVIP

鸦胆子治疣 疫苗接种 病毒增殖指标-显微镜检查inclusion body under microscope 50% tissue culture infection dose ( TCID50) 50% tissue culture infection dose ( TCID50) was titrated on vero cells monolayer and cardiac histological lesions were investigated Neutralization test 病毒+患者血清 接种细胞培养 37℃ 观察细胞病变 以能保护半数细胞管不出现CPE的血清稀释倍数作为终点效价 Blood coagulation inhibition test Neutralization test Seasonal Influenza virus 血凝素＋鸡红细胞→红细胞凝集 B 血凝试验 C 血凝抑制试验 血凝素－抗体(患者血清)＋鸡红细胞－→红细胞不凝集 3.血凝试验和血凝抑制试验 Blood clotting test and blood clotting inhibition test ELISA Enzyme immunohistochemistry Hepatitis A virus 轮状病毒—电镜下 Hantavirus 2.补体结合试验（complement fixationtest,cft） 抗原-抗体 ＋ 补体 ＋ 绵羊红细胞-溶血素 不溶血（阳性） 溶血（阴性） 无游离补体 有游离补体 用已知的可溶性补体检测患者血清中有无相应补体抗体 因补体抗原是病毒内部抗原的抗体-故特异性低于中和抗体 出现早，消失快-近期感染指标 溶血（阴性） 无抗原 * 第二十章 病毒感染的诊断与防治 第一节???病毒感染的诊断 基本程序 选择检测方法的基本原则 一、标本的采集与送检 第一节 病毒感染的诊断 基本原则同细菌，强调以下原则 1.分离病毒或检测病毒抗原 合适标本、早期取材、无菌操作、加“双抗”（PC/SM）杀菌、 50%甘油、盐水、保冷速送 2.病毒感染血清学诊断 早期血清特异性IgM抗体增高有诊断意义 IgG通常取急性期和恢复期双份血清，S2﹥S1 4倍以上有诊断意义 分离培养和鉴定病毒的常用方法 (一）动物接种 (二）鸡胚接种 (三）细胞培养 (四）病毒感染的鉴定 细胞形态改变 红细胞吸附 干扰现象 细胞液pH值改变 二、病毒的分离培养与鉴定 CPE 多核巨细胞 包涵体形成 （五）病毒感染的定量测定 空斑形成单位（Plaque forming unit，PFU） 一个空斑是由一个病毒复制形成的 故可计数病毒数量 也作为病毒毒力指标 50% 致死量（50% lethal dose,LD50）或 50%组织细胞感染量(50% tissue culture infection dose,TCID50) 估计所含病毒的感染量 三、病毒感染的血清学诊断 1.中和试验（ Neutralization test, NT test） 2.补体结合试验(Complement fixation test, CP test) 3.血凝试验与血凝抑制试验(Blood clotting test and blood clotting inhibition test, HI test) 4.免疫扩散试验 四、病毒感染的快速诊断 4.检测病毒核酸 (1)核酸杂交 (2)PCR技术 (3)LAMP (4)生物芯片 2. 电镜技术 观察病毒形态结构 肝炎病毒、轮状病毒和汉坦病毒 1.光学显微镜- 查包含体 3.检测抗原 (1)免疫荧光 (2) 免疫酶技术 ELISA-检测游离抗原 酶免疫组化- 检查胞内病毒抗原 适用于目前无法培养或增殖缓慢的病毒,如HBV、HCV、HPV、HIV、CMV等 优点 特异性强、灵敏度高，效率更高，分析步骤连续化、集成化、微型化、自动化， 使结果更客观。 缺点？ 第二节 病毒感染的防治 一、病毒感染的预防 （一）人工主动免疫 减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗等 1.减毒活疫苗(attenuated lived vaccine) 来源 毒力变异－－减毒株、无毒株 天然菌株筛选－－弱毒株、无毒株 优点 模拟了自然感染过程 保留抗原的天然结构 活菌体起到天然载体作用 免疫力持久等 举例 麻疹、风疹、脊髓灰质炎等 潜在危险性 1.有可能回复为有毒力的病毒 现今极少发现 2.对免疫缺陷的机体可引起感染或并发症 3.可能活化人体内其它潜伏的病毒 4.可能引起持续感染 2.灭活(死)疫苗(inactivated