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2018-01-22 发布于贵州
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western-blot操作流程精选

Western-Blot 操作流程试剂配制（一）母液 1.0mol/L Tris·HCl Tris (MW121.14) 30.29g 蒸馏水 200ml 溶解后，用浓盐酸调 pH至所需点（见下所示），最后用蒸馏水定容至 250ml，高温灭菌后室温下保存。 PH HCl 7.4 约 17ml 7.5 约 16m 7.6 约 15ml 8.0 约 10ml 1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 0.174g 异丙醇 100ml 溶解后，分装于 1.5ml离心管中，-20℃保存。 0.2mol/L NaH PO NaH PO （MW119.98） 12g 2 4 2 4 蒸馏水至 500ml 溶解后，高压灭菌，室温保存。 0.2mol/LNa HPO Na HPO ·12H2O（MW 358.14） 71.6g 2 4 2 4 蒸馏水至 1000ml 溶解后，高压灭菌，室温保存。 10％SDS SDS 10g 蒸馏水至 100ml 50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 10％过硫酸胺（AP）过硫酸胺 0.1g 超纯水 1.0ml 溶解后，4℃保存，保存时间为 1周。（可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在 EP管中，一次性多装几管，使用时加入超纯水即可） 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8） Tris (MW121.14) 45.43g 超纯水 200ml 溶解后，用浓盐酸调 pH至 8.8，最后用超纯水定容至 250ml，室温下保存。 0.5mol/L Tris·HCl（pH6.8） Tris (MW121.14) 15.14g 超纯水 200ml 溶解后，用浓盐酸调 pH至 6.8，最后用超纯水定容至 250ml，室温下保存。 40％Acr/Bic（37.5：1）丙稀酰胺（Acr） 37.5g 甲叉双丙稀酰胺（Bic） 1g 超纯水至 100ml 溶解后 4℃保存。使用时恢复至室温且无沉淀。 20％Tween20 Tween20 20ml 蒸馏水至 100ml 混匀后 4℃保存。（二）使用液单去污剂裂解液（PMSF）： 1mol/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5ml