回收实验干扰.pptVIP

实验六：回收试验和干扰试验 一、实验目的 1．掌握GOD-POD法测定血糖的原理及临床意义。 2．掌握回收试验的原理和方法。 3．掌握干扰试验的原理和方法。 二、实验原理 1、GOD-POD法测血糖原理： 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。后者在过氧化物酶（peroxidase，POD）的作用下与色原性氧受体4-氨基安替比林偶联酚缩合成红色醌类化合物，即Trinder反应。该红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 3、干扰实验原理： 选用维生素C做GOD-POD法测血糖的干扰试验，维生素C可和GOD反应生成的H2O2发生反应，使部分H2O2不能参与第二步POD催化的偶联反应，从而降低显色强度，产生负的测定误差。 四、试剂 1．血清标本 含血糖2.2mmol/L的血清（回收实验用） 含血糖6.7mmol/L的血清（干扰实验用） 2．葡萄糖标准液（80mmol/L） 3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒 4. 1g/L、2g/L 、3g/L维生素C溶液 五、操作步骤 1、回收样品制备 基础样品：血清0.9ml + 0.1ml蒸馏水 回收样品Ⅰ：血清0.9ml+0.01ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.09ml蒸馏水 回收样品Ⅱ：血清0.9ml+0.06ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.04ml蒸馏水 回收样品Ⅲ：血清0.9ml+0.09ml 80mmol/L葡萄糖标准液+0.01ml蒸馏水 2．干扰样品制备 基础样品：血清0.9ml+蒸馏水0.1ml。 干扰样品Ⅰ：血清0.9ml+1g/L维生素C溶液0.1ml 干扰样品Ⅱ：血清0.9ml+2g/L维生素C溶液0.1ml 干扰样品III：血清0.9ml+3g/L维生素C溶液0.1ml 六、结果计算 4．计算结果请填入表内： 七、注意事项 八、方法学评价 回收实验： 一般检验方法要求回收率在95%～105%之间，最为理想的回收率应是100%。回收率接近100%，说明分析方法对于分析物无论在纯溶液中，还是在复杂的基体环境中，反应能力是一致的，分析物不受基体效应影响，若回收率明显偏离100%，说明分析物处于的基体环境不同，反应能力有明显差别。 干扰试验： 干扰试验的方法主要有“配对差异”试验及用病人标本作偏差分析。所谓“配对差异”试验，即将不同浓度的干扰物加入到实验标本中，然后分别测定加与不加干扰物的标本，比较二者有无偏差，并了解干扰物浓度与偏差的关系。所谓用病人标本作偏差分析即选择病人标本，如肝脏、肾脏或心脏疾病患者，用服用了某种可能有干扰的药物的病人标本，以及含有高胆红素，高血脂和血红蛋白的标本，用候选方法和参考方法同时测定，将两方法的测定结果进行比较，以确定某物质对候选方法是否有干扰及干扰程度。本次实验所选用的方法为“配对差异”试验。 这两种干扰试验各有优缺点，第一种方法的不足之处是实验标本的介质可能与病理标本的介质不尽致，病理标本中的干扰物可能不是原来的药物，加入的干扰物可能与病理标本中的干扰物不完全相同。第二种方法的不足之处是①病人通常用多种药物，难以确定干扰物；②不是每种测定项目均有参考方法，而且有的参考方法难以在临床实验室中开展；③参考方法亦可能受某些物质的干扰。两种方法同时使用，会起互补作用。 *Allison Anne Welder, Ph.D. * * * * * * * * * * * 2、回收实验原理 将被测定物标准液加入病人标本中，作为分析样本；原病人标本中加入等量的无分析物的溶剂作为基础样本；用候选方法测定并得到各自浓度，计算回收浓度及回收率。通过测定GOD-POD法测血糖的回收率，能较确切地反映该分析方法比例系统误差的大小，从而对方法的准确性作出可靠评价。 1、主要器具 微量移液器 三、器材 三用水浴箱 722型可见光分光光度计 计算器 3、按下表操作 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 酶酚试剂 0.01 0.01 0.01 — — 各个样品 — 0.01 — 5.5mmol/糖标 — — — — 0.01 DDW 干3 回1 回基 S B 加入物(ml) 回2 — — 0.01 1.5 干2 — — 0.01 1.5 干1 — — 0.01 1.5 干基 — — 0.01 1.5 回3 — — 0.01 1.5 混匀，置水浴箱37℃，15分钟，505nm空白管调零， 722型分光光度计分别测各管A值。 （一