罗丹明6G荧光共振能量转移及其.pdfVIP

第 ３３卷 分析化学 （ＦＥＮＸＩＨＵＡＸＵＥ）　研究简报 第 ４期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 P ２００５年 ４月S ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ５４６～５４８ 2 2 P W D 吖啶橙-罗丹明 ６Ｇ荧光共振能量转移及其 W F 罗丹明 ６Ｇ荧光猝灭法测定蛋白质 ( W T r i . a ＊ C 刘保生 　高　静　杨更亮 l C V （河北大学理化分析中心，河北省分析科学技术重点实验室，保定 ０７１００２） Y e r T s i 摘　要　研究了吖啶橙 （ＡＯ）与罗丹明 ６Ｇ（Ｒ６Ｇ）之间能量转移的最佳条件。在 ｐＨ＝７．２０的 Ｔｉｒｓ-ＨＣｌ缓冲溶 . o N n 液，十二烷基苯磺酸钠介质中，ＡＯ-Ｒ６Ｇ能够发生有效能量转移，使 Ｒ６Ｇ荧光增强。蛋白质的加入使 Ｒ６Ｇ荧 E ) 光猝灭，以此建立了利用 ＡＯ-Ｒ６Ｇ荧光共振能量转移间接测定蛋白质的新方法。牛血清白蛋白、人血清白蛋 T 白工作曲线线性范围分别为 １．０～３１和 １．０～３０ｍｇ／Ｌ；检出限分别为 ０．３２和 ０．３３ｍｇ／Ｌ；平行 ６次测定相对 标准偏差为 １．１％～２．０％；回收率为 ９６．７％～１０３．２％。此方法的稳定性好，选择性高，用于人血清试样中总 蛋白含量的测定，与常用的双缩脲法基本一致。 关键词　吖啶橙，罗丹明 ６Ｇ，荧光共振能量转移，猝灭法，蛋白质 １　引　　言 荧光共振能量转移是指电子激发能，在适当的能量给予体和接受体对之间的传递，传递距离最大可 ［１］ ［２］ ［３］ 达 ７．０～１０．０ｎｍ。该方法已用于无机离子 、有机物 、生物 、分子微区结构的分析以及作为核酸荧 ［４］ 光探针的研究 等许多领域。具有比光度法灵敏度高，与常规荧光法和共振光散射相比受瑞利散射光 ［５］ 干扰小，重现性好的特点 。本方法作为表征蛋白质的荧光探针的研究尚未见报道。本实验利用吸收 光谱和荧光光谱，研究了在十二烷基苯磺酸钠介质中，以吖啶橙 （ＡＯ）作为能量给体，罗丹明 ６Ｇ（Ｒ６Ｇ） 作为能量受体的能量转移体系，发现当 ＡＯ和 Ｒ６Ｇ摩尔比为 １∶４时，其能量转移最好，蛋白质的加入又 使其 Ｒ６Ｇ荧光猝灭。以此建立起 ＡＯ-Ｒ６Ｇ能量转移荧光猝灭法测定蛋白质的新方法。该体系与蛋白 质作用快，方法简便，选择性好，线性范围宽，重现性好。 ２　实验部分 ２．１　仪器与试剂 ＲＦ-５４０荧光分光光度计 （日本岛津公司）；Ｆ-４５００荧光分光光度计 （日本日立公司）；ＵＶ-２６５紫外 可见分光光度计 （日本岛津公司）。牛血清白蛋白 （ＢＳＡ）（北京奥博星生物技术责任有限公司）；人血清 白蛋白 （ＨＳＡ）（Ｓｉｇｍａ公司）；卵清白蛋白 （ＯＶＡ）（天津现代高科技研究院）；酪蛋白 （Ｃａｓｅｉｎ）。上述蛋白