分子生物学基本研究方法03.pdfVIP

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2018-01-12 发布于江西
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分子生物学基本研究方法03.pdf

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5.4.4 定点突变技术（site-directed mutagenesis） Introduce specific Point Mutations (single base changes) into Cloned Gene. • 目的： • 通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列。 • 应用： • 研究某个（些）氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响， • 改造DNA调控元件特征序列， • 修饰表达载体， • 引入新的酶切位点等。诱变寡核苷酸引物应用DNA聚合酶延伸诱含单拷贝野生型靶序列的的导介酸苷核寡单链重组M13DNA 变寡核苷酸引物 D N A 转染大肠杆菌，筛选携术技变突带突变体克隆的M13噬菌斑纯化待筛克隆，序列分析验证突变体 AGGCGGCTACGTGGCCTA AGGCGGCTAGGTGGCCTA 5 3 模板DNA 3 5 ’ ’ ’ ’ 引物变性和退火 F 重叠延伸介导的定点 5 FM 3 5 2 3’ ’ ’ ’ 5’ 3 5 3’ R 诱变 ’ R2 ’ 1 M 2 5 3’ 5’ 3 模板DNA分别和引物对1 ’ ’ 3 5’ 3’ 5’ （正向诱变引物FM和反 ’