Forskolin对转化细胞膜流动性的影响.pdfVIP

维普资讯 第 5卷 第 1期 自然科学进展—— 国家重点实验宣通讯 1995年 1月 n Forskolin对转化细胞膜流动性的影响 ．，o 沈蔚茵 周爱儒 (北京 医科大学生物化学教研室 r北京 10瞄 3) (清华大学 生物膜与膜生物工 程国家重点实验室 ，北京 100084) 摘要 实验采用 了荧光偏振、准弹性光散射和圆二色等技术，研究了在腺苷酸环 化酶激活剂 Forskolin作用下， H．TdR诱导转化的c3H10细胞膜 流动性、细胞表面 电荷密度及膜蛋 白构象的变化，发现Forskolin使转化细胞膜的流动性显著降低，作 用高峰在 2h左右 ，ECS0为 30~mo1／L．此外 ，在 Forskolin作用下 ，细胞表面 电荷 密度下降，膜蛋 白构象的有序性增加 ．这些变化很可能是 Forskolin抑制癌瘤细胞 增殖，促进其分化，j}亨止其脱落转移的细胞机制之一． 关羹词 一ForskolinC3H-o !壁 铴 害 ／ 细胞膜的主要成分是脂质 、蛋 白质和糖 ．生物膜的脂质组成双层的基本膜骨架 ．蛋白质 按其在膜上的部位分为外周蛋 白和镶嵌蛋 白．膜外层有糖链与膜脂或膜蛋 白相连，并伸向细 ^ 胞外环境，细胞表面带有电荷 ．细胞膜的基本作用在于维持细胞 内环境 的相对稳定，并不断 与外界进行物质、能量和信息交换，膜上的有序结构对生命活动具有重要意义，是细胞生命 ， ●J r ●f 活动的主要结构基础 ．肿瘤的发生与细胞膜系统的变异有密切关系 ．肿瘤细胞与正常细胞相 比，细胞膜的生化组分、理化特性、生理功能均有显著差异，其中膜分子侧 向运动的快慢 已 被作为细胞转化恶变的标志之一 ．抗癌物质作用于肿瘤细胞时，一般都会引起靶细胞膜的改 变，使之理化特性得到改善，有利于恢复其正常的生理功能 ． Forskolin是一种腺苷酸环化酶的激活剂llJ，过去常把它作 为重要的实验工具而广泛应 用 ．它在临床上也是一种有效的心血管药物 ．近年来，人们陆续发现 Forskolin在肿瘤治疗 中也显示 了一定 的作用 J 它可 以拟制肿瘤 的发生 发展和浸 润I3j，但其作用机制仍不清 楚 ．本实验试 图从 Forskolin(FSK)对癌瘤细胞膜的影响方 面初步探讨 其抗癌作 用的细胞 机制 ． 1992-06-08收稿 19944~ 18收佳改稿 联系人 维普资讯 第 1期 沈蔚茵等 ：Forskolin对转化细胞膜流动性 的影响 1 材料与方法 1．1 细胞 为本室所有 的正常的与 H．TdR诱导转化 的鼠胚胎或纤 维细胞 (c lo)2个 细 胞株 ．用 DMEM ／F12(1：1)加 15％小牛血清培养 ．收获时将细胞轻 轻刮下 ， 1000r／rain离 心 5min去 除培养液，用 PBS(pH74)冼 2～ 3次后悬浮于缓冲液备用 ． 1．2 Forskolin 由中国科学院动物研究所提供 ．将其溶于少量 乙醇后 ，用 PBS(pH7．4)配成 100Braol／L 的溶液备用 ． 1．3 膜脂流动性 的测定 ” 荧光标记物 DPH 为Sigma公司产品．预先用四氢呋喃配成 2rnmol／L的储备液，于 4℃ 冰箱保存 ．用前将其用 PBS稀释成 2Braol／L的溶液 ，与细胞悬液 l：l(WⅥ 加入 ，于 3O℃ 温育 O5h后测定 ．荧光光谱 仪为 HITACHIM850型 ．