微生物检验技术-第一章 绪论2.ppt

2.加强业务技术培训,提高检验人员素质 (1)强化检验人员爱岗敬业意识。要保证检测结果的准确性、公正性，必须抓好检验人员思想建设，搞好职业道德教育，使检验人员不仅具有相关的专业知识和熟练的操作技术，而且必须具各对工作的高度责任感和实事求是的工作作风，树立全心全意为人民服务的思想，自觉主动地完成各项工作任务。 (2)检验人员业务培训和知识更新是保证检验质量的关键。可采取多种方式学习和掌握新理论、新技术、新方法。积极参加上级部门组织的业务培训，派检验人员专项进修学习，积极参加业务学习，积极参加国内外学术交流，定期组织业务骨干授课,交流经验,改善部分检验人员专业基础薄弱和理论水平较低的现状，不断提高整体的业务水平。 (3)每年应对检验人员进行质量控制样品考核，综合分析考核情况，找出不足，总结经验，提高检验人员的综合素质。 3.加强微生物检验的质量控制 (1)应严格按照国家规定对试验仪器、设各、器具进行定期的检定、维护和保养。 (2)严格控制培养基、试剂、染色及诊断血清的质量。 (3)确保菌株的良好保存 标准菌株和从样品中分离出的菌株，其保存方法有多种，最理想的为真空冷冻干燥法，但这种方法的操作技术难度大，花费高，需特殊设备，一般单位不易做到。而常规琼脂斜面保存法常因传代次数多，易污染，易变异。近几年来，采用卵黄液普通安瓿熔封法超低温保存菌种，效果很好。 传统检验技术 显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一，也是应用比较早的技术。 实验室中常用的有普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。 利用血细胞计数器在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。 传统检验技术 革兰氏染色技术：是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。 培养计数法： 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液涂在平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 菌落形成单位cfu，colony-forming unit 。 现代微生物检测技术 近几年世界各国的许多机构和学者都致力于快速、简便、特异、敏感、低耗且实用的检测技术和方法的研究。 对微生物的检测，其研究的技术手段产生了很大的变革：微生物检测技术已由培养水平逐步向分子水平迈进；近年来兴起的基因芯片技术及自动微生物检测系统，将从根本上改变微生物的检测方法；气相色谱法、气质联用等现代仪器分析法也应用于微生物检测中。 现代微生物检测技术特点 (一)现代生物检测技术更加注重快速、准确、实用，微生物检测仪器是检测技术的重要载体。其实用性主要体现在微型化、低能耗化、功能专用化、一体化和成像化。 (二)现代微生物检测技术与生物技术成果相结合，比如核酸探针技术、PCR技术、生物芯片技术等均在微生物检验方面有广泛的应用。 (三)大力发展在线无损的微生物检测技术，因为产品生产是一种连续的过程，所以那种破坏性的或侵入性的微生物检测手段将逐步被淘汰，而无损的可以进行原位检测的微生物检测方法将受到欢迎，如生物传感器等。 1. 改进的微生物培养法 微生物培养技术是众多检测手段的基石。固体培养基的发明使微生物培养技术有了质的飞跃，在此基础上传统的微生物培养法在不断的改进中发展。主要表现在是通过在培养基中加入抑菌剂、指示剂、荧光物质等，或经预处理来缩短增菌时间，合并检验步骤，使培养和鉴定一步完成，从而达到快速检测的目的。 如疏水网膜法(HGMF)：采用疏水网膜过滤样品，将捕获了被检微生物的疏水网膜上倾入适当的琼脂，经一定时间培养后即可计数。该法可用于酵母菌、霉菌的计数，也可进行沙门氏菌、大肠杆菌(大肠菌群)的检测，采用人工或机械计数都很方便。 直接荧光过滤膜技术(DEFT)：将样品经特殊滤膜过滤后，经吖啶橙染色，利用紫外线显微镜来快速测定活菌数。 葡萄糖苷酶荧光法：通过在培养基中加入指示剂、色素、荧光物质，成为快速检验大肠菌群的常用方法。 2. 免疫学方法 免疫学方法是以抗原和抗体的特异性结合反应为基础的方法。 免疫方法的优点是样品在进行选择性增菌后，不需分离即可采用免疫技术进行筛选。由于抗原和抗体的结合反应特异性强，可在很短时间内完成，再辅以免疫放大技术来鉴别细菌，使得免疫法具各了快速、灵敏的特点。样品经增菌后可在较短的时问内达到检出度。通常根据检测技术的不同可分为免疫扩散反应、凝集反应、免疫磁珠法、免疫荧光反应、酶免疫测定(ELISA)等方法。 例如常见的污染食品病原细菌，沙门菌、李斯特菌、大肠杆菌、肉毒梭菌等都可以通过免疫学方法进行分析和检测。 免疫法不但经济实用，重现性、灵敏度和特异性也较强。特别是近几年发展的免疫试剂不仅适用于防疫及