天然药物分离技术及结构表征3-1.ppt

天然药物分离技术及结构表征;中药经过各种方法提取后所得的提取液仍是包含诸多成分的混合物，需要进一步的分离精制和纯化处理，才能得到所需成分或单体化合物。但提取液一般体积较大，所含成分浓度较低，因此为了提高浓度，有利于分离精制，首先需要对提取液进行浓缩。 浓缩可通过蒸发或蒸馏来完成，所采用的方法视溶剂和有效成分的性质而定，具体的方法有常压蒸发、减压蒸馏、薄膜蒸发、反渗透法、超滤法等。;1.常压蒸馏法 ;2.减压蒸馏法;如果提取液浓缩到小体积放置后，有固体或结晶析出，可将析出物滤出，供进一步分离；滤液再浓缩，放置，再观察和处理，直到母液蒸干为止。 如含叶药材用70%乙醇提取，在回收乙醇至含醇量近15% -20%时，置于冰箱中，绝大部分叶绿素可沉淀出来。滤除后，可进一步浓缩至近稠膏状时，趁热转移至较小的圆底烧瓶内，水浴加热，直接减压抽气，使提取物发泡成干燥疏松状，待进一步处理。 总之，浓缩过程中应注意尽量避免不必要的损失，防止热敏性成分被破坏。浓缩后的提取液就可以根据中药成分的性质如溶解度、在两相溶剂中的分配比、分子大小、吸附性、解离程度等的差异选择恰当的方法进行进一步的分离和精制。 中药化学成分常规分离精制方法主要有系统溶剂分离法、两相溶剂萃取法、沉淀法、结晶法、盐析法、透析法、分馏法、升华法等。 ;系统溶剂分离技术;两相溶剂萃取法 ;当β100时，达到基本分离只需做一次简单萃取； 当100β10时，则需萃取10-12次才能达到分离； 当β≈1时，即表示KA≈KB 两种成分性质非常相近，无法利用此法达到分离目的。 因此在实际工作中，应选择β值大的溶剂系统，以简化分离过程，提高分离效率。亦可根据值的β大小选择适当的萃取方法。 ;二、各种萃取技术;①有机溶剂萃取剂: 如果从水提液中萃取亲脂性成分，一般选用苯、氯仿或乙醚等亲脂性有机溶剂；如果从水提液中萃取中等极性成分，一般选用乙酸乙酯、丁醇等弱亲脂性有机溶剂或在氯仿、乙醚中加入适量乙醇以增大其亲水性。 ②用于pH梯度萃取法的萃取剂 （3）萃取剂的用量 （4）水提液的浓度要求:其浓度最好在相对密度1.1-1.2之间，过稀则萃取剂用量太大，过浓则两相不易充分接触，影响萃取效率。 ;（5）乳化现象的处理 破坏乳化的方法有： ①较长时间放置； ②轻度乳化可用一金属丝在乳化层中搅动使之破坏； ③将乳化层抽滤； ④将乳化层加热或冷冻； ⑤分出乳化层（有时乳化层就是所需要的成分），再用新溶剂萃取； ⑥若因两种溶剂能部分互溶而发生乳化，可加入少量电解质（如氯化钠），利用盐析作用加以破坏，在两相相对密度相差很小时，也可加入食盐增加水相的密度； ⑦滴加数滴表面活性更强的低级醇类如乙醇、戊醇，把原来的表面活性物质顶替，达破乳目的。 ;（二）逆流连续萃取法;1.仪器装置;2.操作技术 将相对密度小的溶剂相作为移动相置高位贮存器中，而相对密度大者则作为固定相置萃取管内（例如，用氯仿从水提液中萃取脂溶性成分时，可将相对密度大的氯仿作为固定相盛于萃取管内，而将相对密度小于氯仿的水提取液贮于高位容器内），开启活塞，则高位贮存器中溶剂相在高位压力下流入萃取管，由于增加液滴上升的路程和在固定相中停留的时间，而且上升的液滴因遇瓷圈撞击分散成细滴，扩大了两相溶剂萃取的接触面积，增大了萃取接触面积，两相溶剂在萃取管内可自然分层。最后，判断萃取是否完全，可取试样用色谱、显色反应或沉淀反应等进行检查。;3.优缺点 逆流连续萃取法操作简便，萃取较完全，适合各种密度的溶剂萃取。此法克服了简单萃取法操作的麻烦，避免了乳化现象的发生。;（三）逆流分溶法; 工作原理 在多个分液漏斗中装入相对密度小的固定相，然后在 0 号漏斗中加入相对密度大的流动相，振摇使充分混合，静置分层后，分出流动相移入1号漏斗，并在0号漏斗中重新补加新鲜的流动相，分别充分振摇混合。重复上述操作反复多次，混合物中各成分即在两相溶剂相对做逆流移动，由于它们在两相溶剂中的分配系数不同而不断进行分配，经多次转移后，每一成分都应在某一管中有自己的最高浓度，从而达到分离目的。 ;CCD法分离过程示意; 适用范围 CCD法具有很强的分离混合物各组分的能力，特别适合于分离中等极性、分离因子较小及不稳定的物质，甚至对一些用色谱法不能分离的高分子化合物如多肽、蛋白质等都已进行成功分离。但此法不适于分离微量成分、试样极性过大或过小，或分配系数受温度或浓度影响过大及易于产生乳化现象的溶剂系统。 ; 优缺点 CCD法是一种高效率、多次、连续的两相溶剂萃取分离方法，具有操作条件温和、试样易于回收等优点，但操作较繁，消耗溶剂多，在大体积的溶剂中混合物中的微量成分易损