外植体3 玻璃化、试管苗等.pptVIP

2．植物生长调节物质 一般来说生长素因为能促进生根，故也能提高试管苗移栽的成活率。但是，不同的植物有其适宜的生长素种类。如在月季的试验中发现，以NAA诱导生根和提高移栽成活率效果最好；而IAA并不理想，当IAA的浓度超过1mg/L时，反而急剧降低移栽成活率。细胞分裂素一般会抑制根的生长，不利于移栽。如在月季的试验中表明，无论是BA或2-ip对生根和移栽都有抑制效应，即使在很低的浓度下也可发现。 3．无机盐浓度 试验结果表明，降低无机盐的浓度对植物生根效果较好，有利于移栽成功。 4．活性炭 在生根培养基中加入少许活性炭，对某些月季的嫩茎生根有良好作用，尤其是采用酸、碱和有机溶剂洗过的活性炭，效果更佳。但活性炭对有些月季品种的促根生长无反应。 5．环境因子 环境条件也影响试管苗移栽的效果，关键是控制好移栽前10d的光、温、湿。做好适当遮阴工作，避免太阳光直射，造成试管苗迅速失水而死亡。温度一般保持在25℃～30℃为好。开始几天最好用烧杯罩住移栽苗，使其周围的相对湿度保持在85%以上。 6．移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐渐过渡 试管苗出管后，要将其上面的培养基洗净，以免杂菌滋长。对于移栽后成活比较困难的植物，第一次移栽时最好选用灭菌过的基质，以提高其移栽成活率。 组培中其他常见问题和解决措施 初始培养阶段 继代培养阶段 生根阶段 一、初始培养阶段 1、培养物水浸状、变色、坏死、茎断面附近干枯 可能原因：表面杀菌剂过量，消毒时间过长，外植体选用不当（部位或时期）。 改进措施：调换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间，试用其他部位，生长初期取材。 第六节 外植体的玻璃化现象及其预防措施 一、什么叫玻璃化现象？ 是指组培苗出现叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低的现象。 二、玻璃化苗的危害性 由于其组织畸形，吸收养料与光合器官功能不全，分化能力大大降低，因而很难继续用作继代培养和扩大繁殖的材料；加上生根困难，很难移栽成活。 三、玻璃化的原因是什么？ 玻璃化的起因是细胞生长过程中的环境变化。试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。产生玻璃化苗的因素主要有激素浓度、琼脂用量、温度、离子水平、光照时间、通风条件等。 (一) 激素浓度 激素浓度增加尤其是细胞分裂素浓度提高（或细胞分裂素与生长素比例高），易导致玻璃化苗的产生。 (二)琼脂浓度 培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，水浸状严重，苗向上长。随着琼脂浓度的增加，玻璃化苗比例减少，但由于硬化的培养基影响了养分的吸收，试管苗生长减慢，分蘖亦减少。因此，琼脂的浓度一定要适当。 (三)温度 适宜的温度可以使试管苗生长良好，当温度低时，容易形成玻璃化苗，温度越低玻璃化苗的比例越高。温度高时玻璃化苗减少，且发生的时间较晚。 (五) 通风条件 试管苗生长期间，要求有足够的气体交换，气体交换的好坏取决于生长量、瓶内空间、培养时间和瓶盖种类。在一定容量的培养瓶内，愈伤组织和试管苗生长越快，越容易形成玻璃化苗。如果培养瓶容量小，气体交换不良，易发生玻璃化。 (六)离子水平 植物生长需要一定的矿物质营养，但是，如果营养离子之间失去平衡，试管苗生长就会受到影响。植物种类不同，对矿物质的量、离子形态、离子间的比例要求不同。如果培养基中离子种类及其比例不适宜该种植物，玻璃化苗的比例就会增加。 四、预防玻璃化的措施是什么？ 1．适当控制培养基中无机营养成分 大多数植物在MS培养基上生长良好，玻璃化苗的比例较低，主要是由于MS培养基的硝态氮、钙、锌、锰的含量较高的缘故。适当增加培养基中钙、锌、锰、钾、铁、铜、镁的含量，降低氮和氯元素比例，特别是降低铵态氮浓度，提高硝态氮浓度，可减少玻璃化苗的比例。 2．适当提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度 适当提高培养基中蔗糖的含量，可降低培养基中的渗透势，减少外植体从培养基中可获得的水分；而适当提高培养基中琼脂的含量，可降低培养基的衬质势，造成细胞吸水阻遏，也可降低玻璃化，如将琼脂浓度提高到1.1%时，洋蓟的玻璃化苗完全消失。 3．适当降低细胞分裂素和赤霉素的浓度 细胞分裂素和赤霉素可以促进芽的分化，但是为了防止玻璃化现象，应适当减少其用量，或增加生长素的比例。在继代培养时，要逐步减少细胞分裂素的含量。 4．增加自然光照，控制光照时间 在试验中发现，玻璃苗放在自然光下几天后茎、叶变红，玻璃化逐渐消失。这是因为自然光中的紫外线能促进试管苗成熟，加快木质化。光照时间不宜太长，大多数植物以8h ～12h为宜；光照