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常见根结线虫种类鉴定的研究 摘 要 根结线虫 (Meloidogynespp.)是一类世界上分布广泛、种类繁多、寄主范 围广的植物固着内寄生线虫。迄今为止，已报道的根结线虫有90多种。国外已 有用分子技术来鉴定根结线虫的报道，但国内很少有这方面的研究。本文对收 集于广东、广西、海南、云南、湖南、河南、陕西等地不同植物的78个根结 线虫种群进行了传统的分类，并用结合分子技术对他们进行了分类鉴定研究， 主要结果如下: 1.运用比较形态学的方法、结合同功酶电泳、鉴别寄主试验，从供试种群 中共鉴定出5种根结线虫，分别为南方根结线虫(M.incognita)，花生根结线虫 (M.arenaria),爪哇根结线虫(Mjavanica)，北方根结线虫(M.hapla)，玛雅 古根结线虫 (M.mayaguensis)，后者为中国新记录种。在供试的78个根结线虫 种群中，62个种群为南方根结线虫，3个种群为花生根结线虫，10个种群为爪 哇根结线虫，3个种群为北方根结线虫，1个种群为玛雅古根结线虫。其中发现 1个种群是花生根结线虫和爪哇根结线虫的复合种群。结果表明，南方根结线 虫在上述地区分布广泛，是极其重要的根结线虫。对25个南方根结线虫种群的 鉴别寄主试验表明，1号小种有23个，3号小种有2个，未发现2号和4号小 种，这说明在上述地区南方根结线虫1号小种是优势种群。 2.用常规电泳技术分析了48个纯化种群的醋酶和苹果酸脱氢酶。结果显 示有36个种群的醋酶表型为常见的11,8个种群为常见的J3,1个为Al,2 个为A2,1个为罕见的Vsl-sl表型;有47个种群的苹果酸脱氢酶表型为常 见的N1,1个种群为常见的Nla。其中，两种同功酶表型分别是Il和N1的种 群是南方根结线虫，共有36个种群;表型分别是J3和N1的种群是爪哇根结线 虫，共有8个种群;表型分别是Al,A2和N1的种群是花生根结线虫，共有3 个种群;表型是Vsl-sl和Nla为玛雅古根结线虫。 3.利用引物#C2F3和#1108对41个根结线虫种群mtDNA的CO11和LrRNA 基因间)子列进行特异性PCR扩增，结果表明:有33个种群的扩增片段大小约 为1.7kb,其中28个种群是南方根结线虫，5个种群是爪哇根结线虫:有3个 花生根结线虫种群的扩增片段大小约为1.1kb:有2个种群的扩增片段大小约为 0.7kb，其中一个为根结线虫属在中国的新记录，一个为湛江根结线虫;有3个 北方根结线虫种群的扩增片段大小约为0.5kb。用单条二龄幼虫提取物作模板得 到的结果与大量提取 DNA作模板的结果相同。用限制性内切酶 HinfI对扩增 产物进行酶切，结果表明:所有供试的南方根结线虫都可以被HinfI酶切，且 产生约1.3kb和0.4kb的2个限制性片段;但供试的爪哇根结线虫种群不能被酶 切。另外，研究发现HinfI也不能对花生根结线虫、北方根结线虫及Gx8的扩 增产物进行酶切。由此表明这一技术可以作为快速而可靠地鉴定常见根结线虫 的方法。 关键词:根结线虫 同功酶 线粒体DNA 玛雅古根结线虫 新记录 本文缩写词及英汉对照 AFLP amplifiedfragmentlengthpolymorphism 扩增片段长度多态性 by basepairs 碱基对 ddH20 doubledistilledwater 双蒸水 DNA deoxyribonucleicacid 脱氧核昔酸 dNTP deoxynucleotidetriphosphates 脱氧核昔三磷酸 EB ethidiumbromide 澳化乙锭 EDTA ethylenediaminetetraceticacid 乙二胺四乙酸 EST esterase 醋酶 GOT glutamate-oxaloacetatetransaminase 谷氨酸草酞