第1章 新概念疫苗与基因免疫PPT.ppt

第1章 新概念疫苗 与基因免疫;免疫机制;一、 传统疫苗的研究及应用 ;;合成肽疫苗是用固相合成法合成可诱生特异性免疫反应的多肽片段(抗原表位), 用作疫苗的靶抗原成分； ;;疫苗的 “活”或“死”决定了其诱生免疫应答的类型;二、疫苗新概念;三、新概念疫苗;疫苗的三次革命 ;(一)核酸疫苗;(二)T细胞疫苗(T Cell Vaccine, TCV);1. 治疗某些自身免疫疾病;2. TCV与移植排斥反应 ;3. 治疗某些病毒性疾病;CTL多肽疫苗;TCV的可能机制： ;(三)树突状细胞疫苗;用抗原或抗原多肽体外冲击致敏DC，然后将之回输或免疫接种荷瘤宿主或带病毒特异性抗原的宿主，进行免疫治疗；;四、未来疫苗学的发展方向及展望 ;(二)针对非感染性疾病的新疫苗;(三)新的疫苗传递技术;一、概述 ;一、概述 ;DNA Vaccines;;基因免疫不仅已广泛地应用于抗病毒、细菌、真菌、寄生虫等抗感染免疫中，同时也发现在肿瘤免疫及自身免疫性疾病中起重要作用；;2. 基因免疫系统的建立 ;▽1992年，Tang等， ;▽基因免疫成了抗感染免疫等领域的新的研究热点。 ;①基因疫苗可在体内合成与自然感染状态下表达的蛋白具有相同的构象和翻译加工方式的蛋白抗原； ;④重组质粒DNA在宿主体内存在时间长，产生持久免疫，能刺激黏膜免疫，诱导免疫记忆； ;⑦DNA的制备、贮存极为方便和廉价，也更易进行基因水平上的操作和改造，从而更有利于制备多抗原基因疫苗； ;4. 基因免疫的应用前景 ;二、基因免疫可能的分子机制 ;(一)质粒DNA直接转染体细胞;DNA被摄入肌细胞过程：;(二) 基因免疫中抗原呈递的分子机制 ;;专职APC:巨噬细胞、树突状细胞、B细胞。 ;1. MHC II类应答的机制：;MHC II类应答 ;Th;2. MHC I 类应答的机制：;;三、基因疫苗的载体结构;2.选择的标记基因;3. 启动原核和真核的复制、转录及表达的元件 ;3. 启动原核和真核的复制、转录及表达的元件 ;3. 启动原核和真核的复制、转录及表达的元件 ;四、CpG的免疫佐剂效应在基因免疫中的作用 ;CpG具有免疫佐剂作用----------刺激分泌细胞因子;五、基因免疫中目的基因的来源 ;(一)完整抗原编码基因的基因免疫 ;抗原编码基因: 已知的病原微生物中抗原性较强的蛋白抗原 ;完整抗原基因免疫后在体内可有效地模拟活疫苗的作用。;完整抗原基因免疫 对一些高度变异的病毒，如流感病毒、HIV等有特别有利的方面。 ;(二)以抗原表位为基础的基因免疫 ;1. 抗原表位为基础的基因免疫的优点 ;2. 单抗原表位的基因免疫 ;在单抗原表位前，通常在抗原表位序列前加上一些引导序列，如腺病毒E3引导序列与表位序列融合。 ;Ciemik等;3. 复合抗原表位的基因免疫 ;Genes encoding the Epitopes [ NP(147~155), PP89(168~176) , LCMV(118~126) … …] ;COOH;免疫球蛋白分子的互补决定区CDR具有 ——外显性(总是暴露在外，随时准备与相应抗原决定簇结合)； ——空间限构(限定的空间构型——即其空间构型不会因为编码蛋白的后续修饰如糖基化而改变)。;外源B细胞抗原表位 → 直接克隆表达于CDR中→ 利用CDR限定的空间构型，保证表位的构型正确及免疫原性的稳定， 并利用CDR结构外显的特性，使表位的可接近性(accessibility)好，提高表位被吞噬及呈递的效率。 ;以免疫球蛋白基因为载体的表位基因免疫 ;(三) 表达文库基因免疫 ;病原体;具有所有基因的文库;YES;YES;ELI特殊应用价值;六、基因免疫的免疫途径和方法 ;1. 肌肉免疫 ;肌细胞参与基因免疫诱生免疫应答的可能机制;2. 皮内免疫;3. 脾脏免疫;4. 其他??肠外免疫 ;(二) 免疫方法 ;1. 裸DNA免疫 ;2. 脂质体包裹DNA直接注射 ;③DNA-脂质复合体表面所带的正电荷使之避免与溶酶体结合而被核酸酶降解； ;3. 基因枪免疫;肌肉注射:IgG(IgG2a)、IFN-a(+++)及CTL活性(+++)，IL-4(-)——Th1细胞激活为主； ;基因枪免疫的缺点： ;4. 繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法;质粒DNA从吞噬体内→胞浆内： ;繁殖缺陷细菌携带质粒DNA法：;(三)接种剂量与周期 ;七、免疫保护效果的评价 ;(一)细胞免疫的评价 ;1.淋巴细胞增殖功能检测 ;2.T细胞介导的细胞毒作用;3.细胞因子检测;4.特异性致敏淋巴细胞检测;ELISPOT;(二)体液免疫的评价 ;八、核酸疫苗的安全性评价 ;2.长期表达抗原的问题 ;3.抗DNA抗体的