慢性乙肝患者自然杀伤细胞分泌IL-10水平增加以及与HBV-DNA载量之间的相关性.docVIP

精品论文 参考文献 慢性乙肝患者自然杀伤细胞分泌IL-10水平增加以及与HBV-DNA载量之间的相关性 汪蕾1(通讯作者) 陈莉2 (1湖北中医药大学检验学院 430065; 2湖北省中山医院急诊科 430032) 【摘要】目的 探讨慢性乙肝患者外周血自然杀伤细胞分泌IL-10的水平以及与HBV-DNA载量之间的关系。方法 随机选取20例慢性乙肝患者和20例健康人，分离出外周血自然杀伤(NK)细胞，用ELISA方法检测其分泌IL-10的水平；同时检测慢性乙肝患者HBV-DNA载量。对患者和健康人NK细胞分泌IL-10的水平进行比较，同时分析患者NK细胞分泌IL-10的水平与HBV-DNA载量之间有无相关性。结果 慢性乙肝患者外周血NK细胞分泌IL-10的水平高于健康人 (Plt;0.01)；而且乙肝患者NK细胞分泌IL-10的水平与HBV-DNA载量之间有相关性(Plt;0.05)。结论 慢性乙肝患者的NK细胞分泌抑制性细胞因子IL-10的水平增加。提示肝脏内的NK细胞能通过分泌IL-10作用于其它免疫细胞发挥免疫负调节作用，从而加重了机体免疫抑制状态，无法有效清除病毒。 【关键词】 乙型肝炎 自然杀伤细胞 白细胞介素-10 HBV-DNA 【中图分类号】R392.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）13-0125-03 自然杀伤细胞(natural killer cells, NK cells)在肝脏中占到所有淋巴细胞的30-40%左右。这种组织特异性表明NK细胞在肝脏的免疫功能中发挥了重要功能。目前研究表明NK细胞不仅具有杀伤功能，同时具有免疫调节作用，通过分泌细胞因子调控包括DC在内的各种免疫细胞，从而在免疫反应的起始环节开始增强或抑制免疫应答[1-3]。 近年来发现NK细胞受到刺激后能分泌重要的抑制性细胞因子IL-10，在一些慢性疾病中，这种分泌功能显著增强[4,5]。提示其在疾病的慢性化进展中发挥了负调控作用。本研究通过比较慢性乙肝患者和健康人NK细胞受到刺激后分泌IL-10的能力，以及NK分泌IL-10的水平与患者HBV-DNA病毒载量之间是否有相关性，为深入研究慢性乙肝患者的免疫抑制状态和较低的病毒清除能力提供线索。 1 材料和方法 1.1一般资料 慢性乙肝患者20例来源于湖北省中山医院住院病人，诊断符合2005年慢性乙型肝炎防治指南诊断标准[6]。其中男12例，女8例???年龄24-45岁。近期未使用过免疫调节剂。健康人来自于湖北武汉血液中心的自愿献血者，经检测排除了乙肝等其它的病毒感染。健康组和对照组在性别和年龄的中位数上无统计学差异。 1.2 主要试剂 人淋巴细胞分离液Ficoll(C1077) 购自北京普利莱有限公司。NK细胞的分离试剂盒购自德国Miltenyi公司。IL-10的ELISA试剂盒(BMS215/2) 以及重组人IL-12(34‐8129)和IL-15(34-8159)购自美国eBioscience公司。 1.3 实验方法 1.3.1 分离外周血NK细胞 首先用人的淋巴细胞分离液从外周血分离得到单个核淋巴细胞，过程如下：经过抗凝处理的外周静脉血10ml，加入10mlPBS混匀，轻轻加在10ml的Ficoll分离液上层，在室温下以400g离心30分钟。吸取白膜层后加入3-4倍体积的1640培养液，以200g离心10min，弃上清并洗涤三次。细胞计数后通过NK分离试剂盒将NK细胞分离，过程简述如下：依次加入混合抗体和免疫磁珠，对各种非NK细胞进行标记；随后细胞悬液流经磁场，结合有免疫磁珠的非NK细胞被滞留在磁场中，没有被免疫标记的NK细胞随着冲洗液流出磁场。收集流出的NK细胞并用PBS洗涤两次。 1.3.2 刺激NK细胞分泌IL-10及其检测 在37℃含5%CO2的空气培养箱，在24孔板中，5times;105NK细胞加入500mu;l含10%FBS的1640培养液，加入IL-12(10ng/ml)和IL-15(25ng/ml)。72h后收集细胞悬液，1000gtimes;5min，离心两次，以除去细胞碎片。收集上清后按照ELISA试剂盒说明书对IL-10的浓度进行检测和计算。实验设置不加IL-12和IL-15的对照组。 1.3.3 血清中HBV-DNA含量的检测 血清中HBV-DNA含量的检测由检验科完成。 1.4 统计学处理 应用统计软件SPSS13.0进行数据的统计分析，所有实