转录与转录后加工.ppt

1.概念（※） ：transcription、 promoter、 terminator、 read-through、 transcription factors、 Cis-acting elements、 Trans-acting factors、 ribozyme、 alternative splicing、 2.概述：转录和DNA复制的区别、 Template(模板) 3.E.coli RNA聚合酶（※）：全酶 、核心酶 、功能 4.转录过程（※） 模板的识别：启动子、 -10序列、-35序列 起始 延伸 终止：不依赖ρ因子的终止子、依赖于ρ因子的终止子 转 录 5.真核生物转录特点（※） 6.真核生物基因转录起始的几种研究方法（原理※） 测定转录起点的方法：S1核酸酶图谱技术、引物延伸法 研究顺式作用元件结构的方法： 5’端缺失系列分析法、接头扫描突变法 7.真核生物RNA聚合酶（※） 8.真核生物基因的启动子及转录起始复合物的组装： 类型I启动子 类型II启动子（※）： TATA-box 、 CAAT-box 、 GC-box 类型III启动子：基因内启动子 转 录 总结3种类型启动子及转录起始复合物的组装有哪些规律 转录后加工 rRNA前体的加工(自学) tRNA前体的加工(自学) mRNA前体的加工（※） RNA的自我剪接： group Ⅰ intron、 group Ⅱ intron 真核mRNA前体的剪接（※） 真核mRNA前体的选择性剪接 RNA的编辑 * 具有茎环的发夹结构 * * 顺式作用元件:是指那些与结构基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列。包括启动子 * SL1 由4 种蛋白质组成。其中一个称为TBP，它也是RNA 聚合酶Ⅱ和RNA 聚合酶Ⅲ起始所需的因子。 SL1的行为类似细菌的σ因子。作为一个独立的复合蛋白，它不与启动子特异性地结合，但可以与和启动子特异结合的其它成分相结合。可能其主要功能是使RNA 聚合酶正确的定位在起始位点。 * 5S RNA 启动子在非洲爪蟾(X.laevis)中发现之前，人们都试图寻在起始位点上游寻找启动子序列。但缺失试验表明，即使将起始位点上游的所有序列都缺失，转录仍能起始。 当继续缺失进入基因内，直至到达+55碱基之前，都能继续合成与正常5S RNA大小非常相似的产物。图20.5 表明RNA产物的前面部分与质粒DNA相对应；第二部分代表保持正常的5S RNA的片段。但当缺失延伸过+55时，转录不能再进行。所以启动子位于下游+55的位置，但引起RNA聚合酶Ⅲ起始转录具有一定固定的距离。 当缺失从另一端进入基因，只要前+80bp 保持完整则转录不受影响。但缺失进入此区域，则转录停止。这确定了此启动子的下游边界位置大约在+80。 所以5S RNA 转录物的启动子位于基因+55 和+80 之间。包含此区域的片段可从距起 始位点约55bp 的下游引发后随DNA 起始转录(野生型起始位点是唯一的；当该点缺失 时，转录将在距启动子55bp的最近嘌呤碱基位置起始)。 * hnRNA的物理结构是一个核糖核蛋白颗粒(hnRNP)，颗粒中蛋白质包围着hnRNA * snRNP 中的一些蛋白质可能直接参与了剪接反应，其它的可能需要结构上的作用或snRNA 颗粒间的组装或相互作用。参与剪接的大多数蛋白质是snRNP 的组分，剪接体中的其它蛋白质一般称为剪接因子(Splicing factors)。 （1）甲基化 如：A ? Am 核苷酸的修饰 （1） （1） （3） （2） （4） （2）还原反应 如：U ? DHU （3）核苷内的转位反应 如：U ? ψ （4）脱氨反应 如：A ? I 第一步:核酸内切酶切除插入序列，不需ATP； 第二步:RNA连接酶连接，需要ATP。 核tRNA的酶促拼接 由RNA聚合酶III转录， 加工与原核相似，但3’端的CCA都是后加的， 还有2’-O-甲基核糖。 真核生物 （三） mRNA前体的加工 细菌多数不用加工，转录与翻译是偶联的。 也有少数多顺反子信使RNA必须由内切酶切成较小的单位，然后翻译。 原核生物 初始转录产物：hnRNAs（heterogeneous nuclear RNAs，核内不均一RNA ），是mRNA的前体（pre-mRNA） hnRNA的物理结构是核糖核蛋白 (hnRNP heterogeneous nuclear ribonucleoproteins ) 真核生物 mRNA前体的剪接信号 内含子相同的开头和结尾5’GU…..AG3’ 内部有个保守的A参与形成分支剪接中间物 3’剪接位点AG前有