试验2 细菌内毒素检测.ppt

细菌内毒素检测 鲎试剂 (hóu) 用途 用于细菌内毒素检测、筛查 原理 细菌内毒素激活C 因子， 引起一系列酶促反应， 激活凝固酶原形成凝固酶，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。 鲎试剂：鲎科动物血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品；含Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。 细菌内毒素: G- 存在毒性物质的总称，只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。其毒性成分主要为类脂质A。 中国鲎：血液蓝色，因含有28%的铜离子，遇病毒马上凝固 鲎制剂：检测内毒素（全世界通用检测试剂），毒素污染监测剂和检测人体内部组织是否遭遇病菌感染 快速诊断内毒素血症、细菌性脑膜炎、细菌尿等急难病 鲎试剂——实验操作1 稀释细菌内毒素工作品 1 12 鲎试剂——实验操作 稀释细菌内毒素工作品 1 溶解 加入细菌内毒素检查用水（BET水）1ml，复溶 后置旋涡混匀器上混匀15min 稀释 将上述内毒素溶液进一步用细菌毒素检查用水稀释成浓度（2λ） 2λ = 0.5 EU/ml 鲎试剂——实验操作1 （以12EU/支细菌内毒素工作品为例） 12EU/支 1.2 ml BET水 10EU/ml 1EU/ml 0.2ml 1.8 ml BET水 每步骤稀释均需在旋涡均匀器上混匀30s！ 鲎试剂——实验操作1 （稀释时以1EU/ml作为母液） 1EU/ml 1ml 1mlBET水 0.5EU/ml 1λ = 0.25 EU/ml 2λ 鲎试剂——实验操作2 鲎试剂（TAL）的溶解 2 按标示量加细菌内毒素检查用水于至试剂完全溶解。 注意:不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。 鲎试剂——实验操作3 检查操作 3 鲎试剂——实验操作3.1 供试品管 阴性对照管 阳性对照管 供试品阳性对照管 1 2 3 4 0.1ml供试品 0.1ml检查 用水 0.1ml 2λ的 内毒素溶液 0.1ml含2λ内 毒素的供试品 2λ=0.5 EU/ml 0.1ml内毒素 0.1ml检测品 鲎试剂——实验操作3.2 封闭管口 轻轻摇匀 垂直放入 37℃恒温器 孵育60 min 试管在孵育期间应 避免任何的振动 反应凝固过程 每个反应管加入0.1 ml 鲎试剂 鲎试剂——注意事项 本品仅用于体外细菌内毒检测。 试验所用的器皿需经处理，以去除外源性内毒素，常用方法：250℃干烤至少60 min。操作过程应防止微生物污染。 若试剂有问题，进行鲎试剂灵敏度复核试验 1 2 3 试管取出，缓慢倒转180o 内容物呈实凝胶，不变形，不从管壁滑落，计：+ 不呈凝胶，或凝胶不完整从管壁滑落，计：- 鲎试剂——结果判断 阴性对照管为阳性: 鲎试剂或检查用水或实验器具受到污染; 阳性对照管为阴性：鲎试剂或标准内毒素已经失效；或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确，或标准内毒素的稀释有误； 供试品阳性对照管为阴性: 反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。 鲎试剂——结果判断