环境酸碱性对酶活性的影响.docVIP

课题3 环境酸碱性对酶活性的影响 课题概述： 生物体内的各项代谢，只有在酶的参与下才能迅速进行。酶的本质是蛋白质，其催化作用受环境酸碱性等条件的影响。不同类酶均有其作用的最适 pH，大于或小于该pH，酶的活性就会下降，直至完全遭到破坏。 双氧水对大多数生物体有害，而许多生物体内都有过氧化氢酶等来分解它。 H2O2 ————→ H2O + O2 本实验将以酵母菌为过氧化氢酶来源，利用氧气浓度传感器来测定不同pH环境下酵母菌中该反应的速度，从而确定过氧化氢酶的最适酸碱度。 氧气浓度传感器可测定气体中0—27%范围的氧气的浓度。其核心装置是一原电池，氧气分子进入其中被还原而引起电流变化，即氧气浓度决定了电流变化的大小，进而改变输出电压的大小。因此通过对输出电压的测定即可确定气体中氧气的浓度。 目的： 1．学会氧气浓度传感器的使用方法。 2．学会测定不同pH的环境下酶促反应的速率，并对各速率进行比较。 器材： 实验材料：市售干酵母。 实验仪器及用品：TI—83 Plus图形计算器及CBL系统、氧气浓度传感器（附配套塑料瓶）、玻璃棒、温度计、100mL小烧杯、50mL量筒、刻度移液管、胶头滴管、蒸馏水洗瓶、吸水纸。 实验试剂：3% H2O2溶液、葡萄糖、pH=4 、pH=7、pH=10缓冲溶液。 步骤： 一．实验准备 1．缓冲溶液的配制： (1) pH=4：1000mL 0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液中加入2mL 0.1mol/L HCl。 (2) pH=7：1000mL 0.1mol/L磷酸二氢钾溶液中加入582mL 0.1mol/L NaOH。 (3) pH=10：1000mL 0.05mol/L碳酸氢钠溶液中加入214mL 0.1mol/L NaOH。 2．0.5克葡萄糖溶解在pH=4 、pH=7、pH=10的缓冲溶液中，成为各pH下2%的葡萄糖溶液。 3．0.5g干酵母溶解在25mL2%葡萄糖溶液中，搅拌均匀，放置5—10分钟。 二．设置传感器 1．连接TI—83 Plus图形计算器、CBL系统。 2．将氧气浓度传感器与CBL系统CH1通道相连。 3．打开TI—83 Plus图形计算器、CBL系统，按APPS，选择“CHEMBIO”程序，按ENTER。(见图1、2) 图1 图2 4．在“MAIN MENU”菜单中选择“1：SET UP PROBES”；输入传感器数量“1”，按ENTER。(见图3) 5．在“SELECT PROBE”菜单中选择“7：MORE PROBES”，直至出现氧气浓度传感器。 6．在“SELECT PROBE”菜单中选择“4：OXYGEN SENSOR”。(见图4) 图3 图4 7．输入通道序号“1”；在“CALIBRATION”菜单中选择“1：USE STORE”。(见图5、6) 图5 图6 8．在“OXYGEN UNITS”菜单中选择“1：PERCENT”。 传感器设置完成后即返回“MAIN MENU”菜单。(见图7、8) 图7 图8 三．设置采样方式 1．在“MAIN MENU”菜单中选择“2：COLLECT DATA”。(见图9) 2．在“COLLECT DATA”菜单中选择“2：TIME GRAPH”，预热30秒后，按ENTER。(见图10) 图9 图10 3．输入采样间隔时间：“40”秒， 按ENTER。输入采集数据点的点数：“12”个， 按ENTER。屏幕显示该次采样共需历时480秒，按ENTER。(见图11、12) 图11 图12 4．在“CONTINUE”菜单中选择“1：USE TIME SETUP”。(见图13) 图13 5．输入Y轴(氧气百分含量)的最小值：“19.0”(%)，按ENTER。输入Y轴的最大值：“22.0”(%)，按ENTER。输入Y轴坐标点间隔：“0.5”，按ENTER。随