HPLC法柱后衍生测定乳制品中牛磺酸的含量.docVIP

HPLC法柱后衍生测定乳制品中牛磺酸的含量 垦l聪最王垒CHINADAIRYINDUSTRY HPLC法柱后衍生测定乳制品巾牛磺酸帕含量 姜金斗,刘波,郝岩平 (国家乳制品质量监督检验中心,黑龙江哈尔滨150086) 摘要:建立了高效液相色谱法测定乳制品中牛磺酸含量的方法.采用荧光检测器,柱后OPA衍生剂衍生,色谱柱 为Waerts氨基酸分析柱,柱温为25,流动相流速为0.4mL/min,衍生剂流速为0.4mL/min.标准曲线相关系数为 0.9749;回收率为95.6%;8次样品测定SD为0.3832,变异系数为1.2136%. 关键词:牛磺酸;乳制品;高效液相色谱 中图分类号:TS252.7文献标识码:A文章编号:l00l一2230(2003)04—0047—03 DeterminationoftaurineindairybyHPLCderivationaftercolumn JIANGJin—dou,LIUBo,HAOYan—ping, (NationDairyTestingCenter,Harbin150086,China) Abstrct:AmethodfordeterminationoftaurineindailYbyHPLCisreported.Fluorscencedetector,Waters—aminoacidanalysis columnandderivationaftercolumnwasusedwithcolumntemperature25℃andspeedofmobilephase0.4mL/minandagent ofderivation0.4mL/min.Therelativecoefficientwas0.9749.therecovery95.6%:theSDin8samplebytestingwas0.3832 andCV:1.2l36%. Keywords:taruine;dairy;HPLC O引言 牛磺酸又称牛胆碱(Taurine),其化学名为2一氨 基乙磺酸,是人体最重要的氨基酸之一.普遍存在于 动物体内,特别是海洋生物体内,牛奶中牛磺酸的含 量极低,而母乳中含量是牛奶中的25倍.牛奶喂养的 婴儿发育不如母乳喂养的婴儿,牛奶中缺乏牛磺酸就 是重要原因之一.牛磺酸对婴幼儿大脑发育,神经传 导,视觉机能的完善,钙的吸收有良好作用,是一种对 婴幼儿生长发育重要的营养素.可见用缺乏牛磺酸的 牛奶喂养婴儿势必对婴儿的生长发育,特别是智力发 育造成影响.国家标准中要求婴儿配方奶粉中必须 添加一定量的牛磺酸(≥0.30mg/g). 牛磺酸是一种含硫的氨基酸,易溶于水,不溶 收稿日期:2003—0I—I8 作者简介:姜金斗(1960一),男,高级工程师,从事乳.榆测j仪 器分析方面的研究 于乙醇,乙醚等有机溶剂.常用的测定方法有:酸 碱滴定法,荧光法,氨基酸自然分析仪法,薄层扫 描法和高效液相色谱法.随着高效液相色谱仪的普 及,目前对利用该仪器进行开发研究测定不同样品 的检测技术较多.本研究就是基于高效液相色谱仪 研究适于乳粉样品中牛磺酸含量测定的简便,准 确,快速的测定方法. l实验仪器与材料 1.1主要仪器 LC一4A高效液相色谱仪;RF一530荧光检测 器;SPD一2AS紫外检测器;WATERS745积分仪; Waters5l0泵及自制的柱后衍生器. 1.2试验用试剂 2,4一二硝基氟苯(DNFB);乙睛(色谱纯);碳 酸氢钠;磷酸氢二钠;磷酸二氢钠;磺基水杨酸; 邻苯二甲醛(OPA);乙硫醇;甲醇(色谱纯);硼酸; 氢氧化钠;氢氧化钾;柠檬酸三钠;偏磷酸;牛磺 Vo1.31,No.42003(total155) 酸(生化试剂,进口). 试验材料为婴幼儿配方奶粉. 2试验方法 2.1分析方法的选择 一 般采用柱前衍生的方法,但所用的衍生剂, 色谱柱及流动相等条件各异.本研究共选用了4种 方法进行试验. 2.1.12,4一二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生,c, 柱测定的方法ilI 色谱条件:流动相A为(乙睛):V(水)=l:l; 流动相B为pH=7磷酸缓冲液;紫外检测器,波长 为360nm;流速lmL/min. 研究证明,衍生时间难以准确掌握,从而造成 样品重现性差.乳粉样品中的牛磺酸与其他成分不 能进行有效分离,即5-J’-离度差,不能用于乳制品中 牛磺酸的测定. 2.1.2邻苯二甲醛柱前衍生,C.柱测定的方法 色谱条件为:流动相为(甲醇)(乙睛):V (水)=l:l:8;紫外检测器,波长为330nm;流速为 lmL/min.试验证明所存在的问题与上法同,仍不 能用于乳制品中牛磺酸的测定. 2.1.3邻苯二甲醛柱前衍生,ODS柱测定的方法t 色谱条件:色谱柱:ODS(250mmx4.6mm, 5