三七对铜绿假单胞菌密度感应相关毒力因子表达的影响.pdfVIP

V01．20No．5 ·479· 中国中医药科技2013年9月第20卷第5期Sep．2013 三七对铜绿假单胞菌密度感应 相关毒力因子表达的影响水 王平1△ 夏飞2 叶丽华3 江必武1 2武汉生物制品研究所有限责任公司·武汉430060 (1武汉市第一医院汉西分院·武汉430034 3华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科·武汉430030) 摘要 目的：通过观察三七对铜绿假单胞茵(Pseudomonasaeruginosa，PA)密度感应(Quorumsensing， QS)相关毒力因子表达变化的影响，探讨其作用机制。方法：用不同浓度三七与细菌共培养，采用弹性蛋 白一刚果红降解试验测定弹性蛋白酶活性；采用紫外分光光度法测定绿脓茵素分泌量；结晶紫染色法观 察生物被膜形成量；检测细菌在含三七琼脂平板中的集群运动与泳动能力。结果：三七在25mg／ml、 12．5ms／ml和6．25mg／ml浓度下对弹性蛋白酶活性、绿脓菌素分泌有显著抑制作用，并能减少生物被膜 形成。12．5mg／ml三七作用后细菌泳动能力受到抑制而集群运动无显著变化。结论：三七对铜绿假单胞 茵密度感应相关毒力因子表达均有抑制作用，提示三七可以抑制铜绿假单胞茵密度感应功能。三七可能 是铜绿假单胞茵密度感应抑制剂。 主题词 三七／药理学铜绿假单胞茵／药物作用 体外研究 铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa，PA)是临床常见用LB培养液稀释‰至0．6后加入玻管，3．0ml／管。配制 的引起严重院内获得性感染的条件致病菌之一，能释放多种 J。该菌 毒力因子，如外毒素A、弹性蛋白酶、绿脓菌素等¨。2 浮游态时依靠鞭毛纤毛黏附于不同材质界面，其分泌物有助 取上述不同浓度药液各1．0m1分别加入菌液管中，3管／梯 于细菌运动并形成生物膜(biofilm，BF)，通过生物膜屏障 躲避宿主防御，利用生物膜一浮游态转换导致感染扩散、毒 加入lml 素播散、全身炎症反应综合征甚至最终死亡。密度感应( A鲫值，实验重复3次。 Quorum Sensing，QS)系统能够调控以上多种毒力因子表达。 2．2绿脓茵素分泌检测u1收集上述菌液离心，160009离 QS系统普遍存在于细菌内并在基因水平上发挥细菌细胞间 心5分钟取上清，加入2．0rnl氯仿，分离下层溶液并加入 的特殊交流作用，对形成复杂的生物膜的过程也起到重要作 0．2mol／LHCl 0．8ml，取上层液体离心，16 0009离心2分钟， 用H。o；这表明可通过阻断或干扰方式作用于Qs系统，减少取上清测定A锄值，实验重复3次，取平均值。 毒力因子的产生，并通过干扰BF分化从而恢复铜绿假单胞 2．3弹性蛋白酶检测№。71收集上述菌液上清，每管取 菌对抗生素的敏感性。本实验利用三七作用于铜绿假单胞 菌，观察其对毒力因子表达与生物膜形成的影响，探讨可能 mL刚果红弹性蛋白)，37％反应18小时。反应完成后离心， 的作用机制。 160009离心5分钟，取上清测A栖值，实验重复3次，取平 1材料 均值。 1．1 菌株与培养液野生标准株(PA01)：本实验室保存； 2．4生物被膜形成能力检测M1准备2cm长硅胶管高压 LB培养液：含1％胰蛋白胨、0．5％酵母提取物、l％氯化钠。