-80℃条件下不同时间外周血干细胞冻存效果的观察.docVIP

精品论文 参考文献 -80℃条件下不同时间外周血干细胞冻存效果的观察 孙淼 项军 周明先 王苇 叶金松 刘春华（江苏省靖江市人民医院血液科 江苏靖江 214500） 【摘要】目的 观察外周血干细胞在-80℃条件下保存时间与细胞活性的关系。方法 采用一种简便的-80℃干细胞冻存方法，其干细胞保护剂终浓度为5%二甲基亚砜（DMSO），3%羟乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HAS）,不经程序降温，直接-80℃冰箱冻存，并调整细胞浓度为（2～4）times;107 /ｍｌ，分别对冻存１、３、６、９、１２月干细胞活性进行检测，观察台盼蓝拒染率和ＭＮＣ、ＣＤ３４＋细胞的回收率。结果　干细胞活性在１２个月内均无明显下降，其台盼蓝拒染率和ＭＮＣ、ＣＤ３４＋细胞的回收率都在８０％以上。不同时间冻存的干细胞活性比较无明显统计学差异（Ｐ＞０.０５）。结论　5%DMSO、3%HES和4%HAS作为干细胞冷冻保护剂直接在-80℃冰箱冻存外周血干细胞的方法能有效地保护外周血干细胞活性。 【关键词】造血干细胞移植 外周血干细胞 冷冻保存 【中图分类号】R329.2+7 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2011）24-0059-02 自体造血干细胞移植是治疗恶性血液病的有效手段之一，但细胞冷冻复苏后的活力是移植成功的关键。如能对细胞进行适当有效地冻存，则细胞活力保持完整，损伤较少，移植后造血功能早期得到重建；反之则相对延迟，甚至失败。以5%二甲基亚砜（DMSO），3%羟乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HAS）作为干细胞冷冻保护剂直接-80℃冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、实用、安全、可靠、成本低的干细胞保存方法，该项技术在干细胞移植中已得到广泛应用。我科对7例外周血干细胞移植的进行了22次外周血干细胞的采集，获取的干细胞均采用上述方法冻存，取得了满意的效果。本文对30份同一细胞浓度在-80℃条件下冻存时间对外周血干细胞的保存效果进行实验观察。 1 材料与方法 1.1 一般资料 7例患者中男5例，女2例，年龄23～50岁。非何杰金氏淋巴瘤6例，急性髓细胞性白血病（M2）1例。 1.2 干细胞动员与采集 所有病例均为自体外周血干细胞移植，动员方案为化疗+G-CSF。化疗方案原则上采用对相应肿瘤有效的联合化疗方案并适当调整剂量。于联合化疗后WBC从谷底开始回升时予以G-CSF(5～10mu;g/ｋｇ/ｄ，皮下注射)，当白细胞＞4.0times;109/ｍｌ，MNC＞10%时开始采集。血细胞分离机为美国血液公司的MCS+。循环血量为2～4倍体循环量，采集3～4次，获得的单个核细胞数范围在（60.3～93.7）times;107/ｍｌ。 1.3 外周血干细胞冻存 1.3.1 冻存保护剂 DMSO为上海试剂二厂产品；羟乙基淀粉为德国费森尤斯卡比有限公司生产；人血白蛋白为河南华兰生物有限公司产品。 1.3.2 冻存设施 -80℃冰箱为日本三洋公司产品；空气净化工作台为苏州苏净集团产品；冻存袋为美国百特公司产品，容量200ml/袋。 1.3.3 冻存液 5%二甲基亚砜（DMSO），3%羟乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HAS）[1]。 1.3.4 冻存方法 提取的干细胞以细胞终浓度（2～4）times;107/ｍｌ[2]，小心悬浮于冷冻液中，并加入肝素，分装于低温储存袋中，立即放入-80℃低温冰箱。 1.4 指标检测 分别于1、3、6、9、12个月快速37～40℃水浴复苏，测其台盼蓝拒染率和ＭＮＣ、ＣＤ３４＋ 细胞的回收率[3]。 2 结果 2.1 参照推荐干细胞保存细胞终浓度（2～4）times;107/ml，我科将采集的细胞终浓度控制在上述范围。 2.2 在不同时间点检测外周血干细胞冻存的效果，结果均以均数plusmn;标准差（x-plusmn;s）表示，t检验求出P值。见表。 表 1～12个月-80℃冻存效果 回收率（%） 冻存时间（月） 台盼蓝拒染率（%） MNC CD34+细胞 1 93.23plusmn;4.25 9