不同砷化合物对人胚肾细胞系HEK-293毒性的研究.docVIP

精品论文 参考文献 不同砷化合物对人胚肾细胞系HEK-293毒性的研究 张娜（太航医院 山西太原 030006） 【摘要】目的 观察不同砷化合物对体外培养的的人胚肾细胞系HEK-293细胞毒性。方法 培养的HEK-293分别暴露于三氧化二砷（As2O3, iAs Ⅲ，0～50mu;mol/L）、砷酸氢二纳（Na2HAsO4bull;7H2O，iAsⅤ，25～500mu;mol/L）、二甲基砷酸钠（C2H6ASO2Na﹒3H2O，DMA，25～500mu;mol/L）24h，应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率。结果 不同剂量范围内的iAsⅢ、iAsⅤ除了50，100，300mu;mol/L C2H6ASO2Na﹒3H2O均能够显著降低HEK-293的细胞生存率(Plt;0.05);对细胞的毒性从从大到小依次为:iAsⅢgt;iAsⅤgt;DMA。结论 通过氧化应激损伤，三种形态砷化物在一定剂量范围内对人胚肾细胞系HEK-293细胞有毒性作用。 【关键词】三氧化二砷 砷酸氢二钠 砷中毒 人胚肾细胞系 【中图分类号】R914 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）22-0120-02 随着社会发展，砷在工农业、医药及化学领域被广泛应用，这在不同程度上造成环境污染，直接或间接影响到人体的健康。但由于目前通过动物实验无法模拟其致癌性，其慢性中毒机制及癌变机制尚不清楚。砷进入机体后迅速入血并随血液分布到全身各个器官,肾脏为其排泄、蓄积和毒性作用的主要靶器官[1, 2]。目前，有关砷暴露对肾脏和肾细胞影响的实验研究尚不多见，本研究观察不同砷化合物对体外培养的人胚肾细胞系HEK-293的细胞生存率影响，为进一步了解不同形态砷对肾脏损伤的作用方式提供研究基础。 1 实验材料 1.1 主要试剂 三氧化二砷（衡阳市福鑫化工厂），砷酸氢二钠（上海新宝精细化工厂），二甲基砷酸钠（上海沪峰化工有限公司），甲基偶氮唑盐(MTT,美国Sigma公司)。 1.2 仪器 CO2培养箱(日本三洋公司),低温离心机(日本Sigma公司),倒置显微镜（连庆88078），酶标仪(Model1680，日本)。 2 实验方法 2.1 细胞培养 HEK-293细胞常规方法培养。以含10%胎牛血清，100U/ml青霉素，100mu;g/ml链霉素的DMEM高糖完全培养液培养HEK-293细胞株,置于37℃,5％ CO2培养,待细胞进入对数生长期，用0.15 %胰蛋白酶消化传代。 2.2 细胞处理 待细胞生长良好，取对数生长期细胞胰酶消化后，1*105/ml密度接种于96孔板上（留有8个孔未加细胞，做空白对照），1*105/ml密度接种于24孔板上，培养24小时后，分别加入含砷化物培养液，各种砷化物浓度分别为，As2O3:0，0.25，1.0，25.0，50.0mu;mol/L；Na2HAsO4bull;7H2O：0，25.0，50.0，100.0，200.0，300.0，400.0，500.0mu;mol/L；二甲基砷酸：0，25.0，50.0，100.0，200.0，300.0，400.0，500.0mu;mol/L。0.25～300mu;mol/L每小组设立7个平行孔，400.0和500.0mu;mol/L每小组设立5个平行孔，设立8孔只加培养液，不加细胞和任何药物作为阴性对照。每孔最终体积为200mu;L。将培养板置于37℃，5％CO2培养箱分别培养24h。 2.3 四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖率 接种96孔板细胞与As2O3，Na2HAsO4bull;7H2O，二甲基砷酸共培养24h的HEK-293细胞每孔加入5g/LMTT液20mu;L，继续培养4h后吸除培养液，各加入二甲基亚砜200mu;L，震荡10min。在酶标仪上测定各组在波长570nm和490nm的吸光度值，根据公式：细胞相对生长抑制率=1-(实验组A值/对照组A值)times;100%，计算各组HEK-293细胞的生长抑制率[3]。 2.4 统计分析 所有的统计数据以均数plusmn;标准差（x-plusmn;s）表示，统计分析用Sigmaplot 12.0统计软件，采用t检验进行分析，P＜0.05有统计学意义。 3 实验结果 不同砷化物对HEK-293细胞增殖的