缺乏叶酸培养基中自发及诱发的染色体畸变u-科学学研究.pdfVIP

遗传学报，11(4);318-324,1984 Acta Genetica Sinica 缺乏叶酸培养基中自发及诱发的染色体畸变’‘ 周 宪 庭 （中国科学院遗传研究所，北京） JohnA.Reidy 陈达 能 美（国卫生部疾病控制中心遗传实验室） 在缺乏叶酸的基本培养基中，淋巴细胞染色体对环境因子有更高的敏感性，结果表明这个 休系可能用于检测环境有害因子对人体的影响。 Sutherland(1977）发现人体染色体脆性位点的表现依赖于组织培养基的组成43〔，其 主要因素是培养基中缺乏叶酸和胸普。Glover(1981）认为脆性位点是由于合成DNA所 需的胸普酸的枯竭(210胸营酸供应的缺乏，必然会引起DNA合成过程的紊乱，从而千扰 DNA和染色体的复制。本文研究了正常人体淋巴细胞在缺乏叶酸的基本培养基(MEM- FA）中染色体的自发畸变率和诱发畸变率；并和完全培养基M（EM）中自发畸变率和诱发 畸变率进行比较，旨在寻找一种检测环境有害因子的更为敏感的体系。 材 料 和 方 法 一（）实验对象 从113个正常个休 男（61人，女52人。部分为实验室工作人员，部分为行政人员）取 得血样，研究在缺乏叶酸培养基 M（EM-FA）中自发染色体畸变率。从其中12个正常个体 得到血样，进行两种培养基 M（EM-FA和 MEM）中染色体畸变频率的比较研究。从另 外2个正常个体得到血样，进行辐射诱发染色体畸变的比较研究。在 113人中，选择11 个吸烟者 每（天吸烟一包或一包以上，烟龄超过3年并在 1周内未服任何其他药物者）和 16个非吸烟者为对照，进行染色体 “自发O)畸变率的比较研究。 二（）培养条件 0.5毫升肝素处理过的血液接种于9.5毫升Hepes缓冲的Eagle基本培养基 M（EM) 或缺乏叶酸的Eagle基本培养基 M（EM-FA）中。每瓶加人0.5毫升胎牛血清，0.2毫升 PHA(GIBCO),200mML一谷氨酸胺，100微克／毫升链霉素及100国际单位／毫升青霉 素。pH调节至7.5,37℃恒温培养％小时。按常规法收获、制片。 三（）辐射处理 全血10毫升，置于塑料离心管中，在室温下受X线照射 通（用X光治疗机，45kv,15 ma).剂量分别为。、28,56,112和224拉德 r（ads)o剂量率为3.5拉德／秒。照后淋巴 1)本义于1983年8月斗日收到。 本工作在美国疾病控制中心遗传实验室进行。部分结果在美国人类遗传学会第 33届年会上展出，发表于 Amer.1.Hum.Genet.,34:153A(1982)和 Mut.Res.,122:217一221(1983), 4期 周宪庭等：缺乏叶酸培养基中自发及诱发的染色体畸变 319 细胞分别培养于MEM完全培养基和 MEM-FA缺陷培养基中。在对照组和照射组中，所 有的培养、收获及制片和染色体畸变计数条件均相同。大部分数据是在观察者不知研究 组合的情况下观察和计数取得的。 （四）染色体异常分析 生长于两种不同培养基中的细胞，其染色体畸变包括：等点间隙、染色体断裂、缺失、 断片、易位、双着丝点、环以及单体间隙、单体断裂、单体缺失、单体交换等。由于间隙、染 色体和单体断裂常常自发地、频繁地出现于 MEM-FA培养基中，在辐射实验中，仅仅计 数双着丝点、环、断片和缺失畸变。总畸变率为二倍的双着丝点、易位和环，加上断片和缺 失。 结 果 一（）在缺乏叶酸 M（EM-FA）培养基中的自发染色体畸变 共分析113个正常个体的6,270个细胞。总畸变率为0.36断裂／细胞S（.D. 0.25)0 在实验中，发现不同个体间总畸变率有很大的差异。其频率从0.02断裂／细胞到1.34断 裂／细胞 见（表1)。众数为0.21-0.40断裂／细胞。 农1在MEM-FA 培养基中，自发染色体断裂在113个正常人中的分布 Table1 Distrib