生物化学--第二章 蛋白质化学-蛋白质化学3.pptVIP

第三节　蛋白质的一级结构 蛋白质的相关概念 肽的命名、书写及特点 测序过程 特点： ①具有部分双键的性质,不可以旋转 ②肽键比一般的碳-氧键短； ③与肽键相连的氢原子和氮原子呈反式； 3.肽(peptide) 　一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩水形成的化合物，称为肽。在蛋白质分子中，氨基酸借肽键连接起来，形成肽链。 肽和肽键的形成 二、 肽的命名及书写 1.命名： 　习惯：按数量的多少、按来源 　系统：某氨基酰某氨基酰……某氨基酸 2.书写：从N(H)到C (OH) ，具方向性 　三字母符号或单字母符号表示，中间用“·”或“-”表示。例如:Gly-Glu-Lys-Ala (甘氨基酰谷氨基酰赖氨基酰丙氨酸) 在生物体中，多肽最重要的存在形式是作为蛋白质的亚单位。 但是，也有许多分子量比较小的多肽以游离状态存在。这类多肽通常都具有特殊的生理功能，常称为活性肽。 实例：谷胱甘肽(glutathione,GSH) 短杆菌肽;脑啡肽； 　　 　　促甲状腺素释放因子（TRH） ?-天冬氨酸-苯丙氨酸甲酯（甜味剂） 激素类多肽；抗生素类多肽；蛇毒多肽等。 重要的肽 GSH的作用 解毒作用：与毒物或药物结合，消除其毒性作用； 参与氧化还原反应：作为重要的还原剂，参与体内多种氧化还原反应； 保护巯基酶的活性：使巯基酶的活性基团-SH维持还原状态； 维持红细胞膜结构的稳定：消除氧化剂对红细胞膜结构的破坏作用。 3.肽的理化特点： ①肽键的酰氨氢不解离，肽的酸碱性质主要决定于肽键中的游离末端α-NH2、α-COOH及侧链R基上的可解离基团； ②肽中末端α-羧基的pKa值比游离氨基酸的大，末端 α-氨基的pKa值比游离氨基酸的小(?)； ③游离的α-氨基、 α-羧基和R基可发生与氨基酸中相应的类似反应，如茚三酮反应等； ④蛋白质部分水解后所得的肽若不发生消旋，则具有旋光性，短肽的旋光度约等于组成氨基酸的旋光度之和，较长的肽的旋光度则不是简单加和。 二、蛋白质一级结构测定步骤 ?????? 1.测定蛋白质分子中多肽链的数目 　 2.拆分蛋白质分子的多肽链 　　 3.断开链内二硫键 　　 4.分析每条多肽链的氨基酸组成比及数目????? 5.鉴定多肽链的N、C瑞残基 　 6.裂解多肽成小的肽段 　 7.测各肽段的氨基酸序列 　 8.重建完整多肽链的一级结构 　 9.确定二硫键的位置 氨肽酶法 氨肽酶是一类外切酶，它从肽链的N末端逐个向里切。 最常用的氨肽酶是亮氨酸氨肽酶 也会遇到N末端氨基封闭，用焦谷氨酸氨肽酶处理。 氨基酸酰肼可以与苯甲醛作用变成水不溶性二苯基衍生物而沉淀 Gln Asn Cys等不易测出，末端Arg变成鸟氨酸 羧肽酶法 本方法目前最有效。 从羧基端开始向里逐一水解蛋白质 羧肽酶A：释放除Pro，Arg和Lys以个的所有C-末端残基 羧肽酶B：只水解以碱性Arg和Lys为C-末端的肽键 羧肽酶C： 羧肽酶Y：可以作用于任何一个C-末端残基 今有一个七肽，经分析它的氨基酸组成是Lys，Pro, Arg, Phe, Ala,Tyr和Ser，该肽未经糜蛋白酶处理时，与DNFB反应不产生α-DNP-氨基酸，经糜蛋白酶作用后，此肽断裂成两肽段。其氨基酸组成分别是Ala, Ser, Tyr和Lys，Pro, Arg, Phe。这两个肽段分别与DNFB反应可分别生成DNP-Ser和DNP-Lys。此肽与胰蛋白酶反应，同样能生成两个肽段，它们的氨基酸组成分别是Arg, Pro和Phe, Tyr, Lys, Ser, Ala。试问此七肽的一级结构序列是怎样？ 对角线电泳过程 ：把水解后的混合肽段点到滤纸的中央，在pH6.5条件下进行第一向电泳，肽段将按大小及电荷不同分离开，然后 把滤纸暴露在过甲酸蒸气中，使S-S氧化成一对含磺酸基丙氨酸的肽。滤纸旋转90度，在与第一向完全相同的条件下进行第二向电泳。这时大多数氨基酸的迁移率未变，将位于滤纸的一条对角线上，而含磺基丙氨酸的成对肽段将比原来含二硫键的肽小而负电荷增加，结果它们都偏离了对角线。 问题： 有一个A肽，经酸水解分析得知由Lys、Asp、Glu、Arg、Ala、Val 和Tyr组成 。当A肽与DNFB反应后，得DNP-Glu，当用羧肽酶处理后得游离Asp。如果我们在实验中将A肽用胰蛋白酶降解时，得到三个肽，其中一种(Arg、Gln、Tyr),在pH6.4时净电荷为+1，另一种(Ala、Lys) 第三种为（Val和Asn）在pH6.4时，带电荷为零。此外，A肽用糜蛋白酶降解时，也得以两种肽，一种(Gln、Tyr、)在pH6.4时